乳制品中黄曲霉毒素检测

采用标准

国标GB 5413.37-2010

方法/原理/步骤

　　1.样品前处理方法

　　适用于乳和乳制品中黄曲霉毒素的测定。

　　⑴提取方法：

　　①乳：

　　称取50 g(精确至0.01 g)混匀的试样，置于50 mL具塞离心管中，在水浴中加热到35℃～37℃。在6000转/分钟下离心15 min。收集全部上清液，供净化用。

　　②发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：

　　称取50 g(精确至0.01 g)混匀的试样，用0.5 mol/L的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH值至7.4，在9500转/分钟下匀浆5 min，在水浴中加热到35℃～37℃。在6000转/分钟下离心15 min。收集全部上清液，供净化用。

　　③乳粉和粉状婴幼儿配方食品：

　　称取10 g(精确至0.01 g)试样，置于250 mL烧杯中。将50 mL已预热到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒将其混合均匀。如果乳粉仍未完全溶解，将烧杯置于50℃的水浴中放置30 min。溶解后冷却至20℃，移入100 mL容量瓶中，用少量的水分次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后分别移至两个50 mL离心管中，在6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供净化处理用。

　　④干酪：

　　称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g(精确至0.01 g)，置于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，在9500转/分钟下匀浆5 min，超声提取30 min，在6000转/分钟下离心15 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振摇2 min，待分层后，将下层移于50 mL烧杯中，弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次。将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2 mL，浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤，洗涤液一并倒入50 mL离心管中，加水稀释至约50 mL，在6000转/分钟下离心5 min，上清液供净化处理。

　　⑤奶油：

　　称取5g(精确至0.01 g)试样，置于50 mL烧杯中，用20 mL石油醚将其溶解并移于250 mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。

　　⑵净化方法

　　①免疫亲和柱的准备：

　　将一次性的50 mL注射器筒与亲和柱上顶部相串联，再将亲和柱与固相萃取装置连接起来。

　　②试样的纯化：

　　将上述样品提取液移至50 mL注射器筒中，调节固相萃取装置的真空系统，控制试样以2mL/min～3 mL/min稳定的流速过柱。取下50 mL的注射器筒，装上10 mL注射器筒。注射器筒内加入水，以稳定的流速洗柱，然后，抽干亲和柱。脱开真空系统，在亲和柱下部放入10 mL刻度试管，上部装上另一个10 mL注射器筒，加入4 mL乙腈，洗脱待测物，洗脱液收集在刻度试管中中，洗脱时间不少于60秒。然后用氮气缓缓地在30℃下将洗脱液蒸发至近干(如果蒸发至干，会损失待测物)，用乙腈-水溶液(1+9)稀释至1 mL。

仪器设备

　　2. LC-MS/MS仪器条件

　　①液相色谱参数：

　　色谱柱：Phenomenex Luna PFP(2) 3µm,100Å, 50×2mm

　　柱温：28℃

　　流动相：含0.1%甲酸，甲醇/5mM乙酸铵水溶液(60:40)

　　流速：0.4 mL/min

　　进样量：10µL

　　运行时间：3min

　　②质谱参数：

　　以下参数以API 3200为例，具体参数和检测灵敏度视仪器不同而有差异

　　离子源参数：

　　CUR: 20 psi

　　IS: 5500 V

　　TEM: 425°C

　　GS1: 30 psi

　　GS2: 60 psi

　　Ihe: On

　　CAD: High

实验结果和结论

　　实验结果

　　黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1提取离子流图如下：

　　结论

　　AB SCEIX提供的全方位解决方案可同时测定乳及乳制品中B1、B2、G1、G2和M1共5种黄曲霉毒素。

　　AB SCIEX公司提供免费下载的用于测定黄曲霉毒素的iMethod，在Cliquid软件中安装后可直接使用。