发布时间:2020-08-18 08:37 原文链接: 免疫分子与受体工程学

基 本 方 案 构 建 MHC I-Ig 二聚体


材 料


编码目的 M H C I 类分子的 c D N A 及合适的引物


M Z w I 和 X k I 限制性内切核酸酶及缓冲液(N e w England Biolabs)


T A 克 隆 试 剂 盒(Invitrogen),可选


p X I g 质 粒(可向作者索取)


10X T 4 D N A 连接酶缓冲液,添 加 5m m o l / L A T P


I Weiss 单位/M1 的 T 4 D N A 连 接 酶(Life Technologies)


L B 平 板 ,含 50M g/m l 氨苄青霉素和 30M g/m l 卡那霉素


L B 培养基,含 50jutg/m l 氨节青霉素


PvuI 限制性内切核酸酶及缓冲液


含有人类基因组 P2 微球蛋白基因的质粒(可向作者索取)


3m o l / L 乙酸钠, p H 5. 2


1 0 0 % 乙醇


J558L 细 胞(可向作者索取)


x/R P M I -10 完全培养基,含 l O m m o l / L H E P E S (完全 R P M I -10/H E P E S )


10m g / m l G 418 (Life Technologies)


14°C 水浴


微量离心机, 4°C


25c m 2 培养瓶


Bio-Rad Gene Pulsei•(或与其相当的电穿孔仪)及用于真核细胞0.4cm间隙