免疫球蛋白纯化技术——纯化小鼠腹水中单克隆抗体

PBS

缓冲液

层析柱高效液相色谱仪

1.  腹水10000 g离心10 min，除去细胞和杂质，在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使终浓度为40 ％饱和硫酸铵搅拌20～30 min

2.  离心，沉淀用40 ％饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS，对缓冲液A（PH8.5 20 mM Tris缓冲液）透析除盐4 ℃过夜

3.  用带有1000 μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液A液平衡的TSK DEAE SPW离子交换层析柱

4.  洗脱流速1 ml/min
 

0～1 min：0→5％缓冲液B（20 mM Tris，PH8.5，含2.0 M醋酸钠）
 

1～20 min（线性梯度洗脱）：5→20％缓冲液B
 

20～22 min：20→0％缓冲液B

5.  洗脱液用紫外280 nm进行监测

6.  收集蛋白峰，进行含量、纯度和活性测定

1.  所用缓冲液和加样粗提物均需0.22 μm滤膜过滤。

2.  在本实验条件下，IgG1峰一般在线性梯度洗脱开始11～12 min。但不同类和亚类抗体以及不同特异性McAb的存留时间（retention time）有所差异。