一些基本概念和基本知识:
1 荧光免疫测定技术的概念:将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记,试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后,测定复合物中的荧光素,这种免疫技术,称为免疫荧光素技术。
2.技术分类:
⑴荧光抗体技术(荧光显微镜技术)
抗原抗体反应后,利用荧光显微镜判
定结果的检测方法。
⑵ 免疫荧光测定技术:
抗原抗体反应后,利用特殊仪器测定
荧光强度而推算被测物浓度的检测方法
3.荧光的产生:
物质吸收外界能量而进入激发状态,在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放,即发光,这种光称为荧光。
这种物质,称为荧光素
由光激发所引起的荧光,为光致荧光
------荧光免疫技术
由化学反应所引起的荧光,为化学荧光
------化学发光技术
4.荧光素的荧光特性:
⑴ 停止供能,荧光现象随即终止
⑵ 对光的吸收和荧光的发射具高度选择性
入射光波长<发射光波长
⑶ 荧光效率: 发射荧光的光量子数
荧光效率=-------------------------------
吸收光的光量子数
⑷ 荧光猝灭现象:荧光素的辐射能力减弱
5.常见荧光素:
⑴ FITC
⑵ RB200
⑶ TRITC
⑷ 镧系:Eu、Tb
⑸ PE
⑹ 其它
常见荧光素的特性:
⑴ FITC:黄色结晶粉末,吸收光:490~495nm,
发射光:520~530nm,明亮的黄绿色荧光。
⑵ RB200: 橘红色粉末, 吸收光570nm,发射光
595~600nm,橘红色荧光。
⑶ TRITC: 紫红色粉末,吸收550nm,发射光
620nm,橙红色荧光。