关于黄曲霉素的检测方法

12月24日，蒙牛牛奶被检出含强致癌物黄曲霉毒素M1。12月26日，蒙牛集团相关负责人表示，造成产品不合格的原因，是当地奶牛饲料因天气潮湿发生霉变，奶牛在食用这些饲料后，原奶中的黄曲霉毒素超标。而眉山工厂原奶质检员在前期的原奶检验上出现失误，导致未能检出黄曲霉素……

送走了三聚氰胺，又迎来了黄曲霉素。看来几经折腾，民众的化学知识倒增长了不少。这次我们主要来聊聊黄曲霉素，重点是关于它的检测方法。

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。

下面先送上一张黄曲霉毒素的近照。

黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子结构上十分接近。这次蒙牛事件的主角是M1。我们来看看各自的化学结构式。

 B1,B2,M1,M2右边是一个五元环结构，B1的不饱和程度要略大于B2，M1和M2上的呋喃环多了一个羟基，而G1和G2是一个六元环结构。这里黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构是产生毒性的重要结构。研究表明，黄曲霉毒素的细胞毒作用是干扰信息RNA和DNA的合成，进而干扰细胞蛋白质的合成导致动物全身性损害。另外黄曲霉毒素B1能与tRNA结合形成加成物，黄曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA与某些氨基酸结合的活性对蛋白质生物合成中的必需氨基酸，如赖氨酸亮氨酸,精氨酸和甘氨酸与tRNA的结合均有不同的抑制作用，从而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成影响细胞代谢。

看来对黄曲霉毒素的检测势在必行。现在主流的检测方法主要有两种，即高效液相-质谱法（HPLC-MS）和ELISA快速检测方法。下面我们摘取相关文献进行讨论。

1. 王岩松等用固相萃取-高效液相色谱/串联质谱检测谷物中黄曲霉毒素 B1 B2 G1 G2 和 M1（下载，提取码XBpS8G8n）。并且优化了液相色谱条件和质谱的相关参数。如可能含黄曲霉素的谷物样品经研磨成粉末后，直接经甲醇-水( V: V = 10: 90) 提取，Oasis HLB固相萃取净化，乙腈-水( 0. 2%甲酸) 梯度洗脱，选择电喷雾离子源( ESI) ，正离子扫描多反应监测(MRM) 模式，外标法定量。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 和M1的定量下限分别为 0.1、0.1、0.2、0.3、0.2ng/g， 平均回收率在74.6% ～89.6% 之间， 测试精密度( RSD) 在5.2% ～ 11.3%之间。方法已用于谷物样品检测，黄曲霉毒素残留量最高达到B1 5.86ng/g 、 G1 8.6ng/g、 M1 4.0ng/g， B2和G2未检出。

2. 裴世春等将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗黄曲霉毒素M1（AFM1）单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化（下载，提取码Namm149p），并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。结果当AFM1-BSA包被质量浓度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀释2000倍时dc-ELISA检测AFM1的IC50为0.75μg/L，检测范围为0.015～4.05μg/L，添加AFM1至0.45μg/L的鲜奶样品中检测回收率平均为80%，dc-ELISA可满足鲜乳中AFM1国家残留限量标准0.5μg/kg的检测要求。该体系可应用于鲜奶制品中 AFM1 大于0.5μg/kg污染样品的快速初筛。