准确检测血清血浆样本中microRNA的利器与应用

　　大量研究表明，血液循环中的microRNA表达变化指征着疾病的发生和发展阶段。同时，血液样品在临床易于获取，且稳定不易降解，因此对于microRNA标记物筛选具有广阔研究前景。

　　血清/血浆样本用于microRNA研究的挑战

　　• 血清血浆中不包含细胞，且microRNA含量低

　　• microRNA高度同源，例如hsa-let-7家族各成员

　　• 红细胞破裂发生溶血后，会释放抑制RT和PCR反应的物质

　　• 常规内参(如U6等)在血清血浆中含量不稳定，不适合作为内参对照基因

　　准确检测血清/血浆样本microRNA的利器

　　丹麦Exiqon 公司miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片，将芯片的高通量优势与PCR的准确灵敏特点完整结合，实现对血清血浆等各种临床样本中的microRNA准确特异检测：

　　• 基于LNA™ZL技术;独特的Universal RT反应

　　• 康成microRNA研究技术服务超过8年，客户SCI文章60余篇，平均影响因子5.5分

　　Human Serum/plasma panel(168 microRNA)

　　专为精确检测血清血浆中microRNA设计，可直接用于microRNA标记物筛选

　　- 重复性好：血浆样本，两次独立实验，相关系数R2达到0.96(图一)

　　- 特异性强：区分单碱基差异microRNA;区分成熟microRNA和前体

　　- 灵敏度高：准确检测血清血浆中microRNA，检测限低至5个拷贝

图一 血浆样本PCR panel重复性实验

最低仅需20μL的血清/血浆样本，即可实现168个microRNA准确特异检测

- 独特的Universal RT反应：一次逆转录制备的cDNA可作为所有microRNA PCR反应的模板
- RNA需求量少，特别适合血清/血浆检测，最低于仅需20μL血清/血浆样本（图二）
- 统一逆转录，简化实验步骤，消除技术误差，提高准确性
- 所含168个microRNA，基于大量文献数据和Exiqon长期积累的丰厚研究成果

图二 血清/血浆样本中miRNA检测结果

严格的质控系统，保障实验结果可靠性

- 溶血判定：实验前用Nanodrop检验样本溶血情况，避免抑制PCR的物质
- 评估RT反应效率：RT反应设置Spike-in
- 监测PCR反应过程：PCR芯片内设阳性对照
- 扩增结果判定：采用SYBR green的PCR方法，可根据溶解曲线判断扩增特异性
- 内参设置：选择血清血浆中稳定高表达的microRNA（miR-423-5P等）为内参，校正数据

Exiqon已在数千例癌症、免疫病等病人的血清/血浆中进行了microRNA筛查和验证