凋亡聚焦：Caspase检测新品

　　Caspase是一组天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶，它们在凋亡中发挥重要作用。一般来说，哺乳动物的caspase可根据功能分类：细胞因子激活(包括caspases 1、4、5、13);凋亡起始(包括caspases 2、8、9、10)和凋亡执行(包括caspases 3、6、7)。

　　市场上有很多caspase检测试剂盒，来检测多种caspase的活性。我们既可以通过荧光标记的底物来检测有活性的caspase，也可以利用荧光标记的caspase抑制剂来标记。你还可以通过免疫组化分析来检测切割的底物如PARP。当然，很多公司也有caspase的抗体，但操作流程长，也不能对活细胞进行成像。

　　为此，Life Technologies公司近日推出了CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent，以检测凋亡时的Caspase 3/7活性。这是一种四个氨基酸的肽段(DEVD)，带有核酸结合染料。大家都知道，DEVD肽段是Caspase 3/7的底物。

　　CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent本身不发荧光，因为DEVD肽段抑制了染料与DNA的结合。然而，当凋亡细胞中的Caspase-3⁄7激活后，DEVD肽段被切割，让染料与DNA结合，并发出明亮的绿色荧光。染料与DNA结合后的发射波长为~530 nm，可利用标准的FITC滤光片观察。

　　与其他方法相比，这种试剂的检测要简单得多。只需将经过稀释的检测试剂加入细胞，孵育30分钟，即可观察。Caspase-3⁄7激活的凋亡细胞将有着明亮的绿色细胞核，而未激活细胞的荧光信号极低。

　　这种分析实现了活细胞内Caspase-3⁄7激活的观察。此外，由于检测中无需洗涤步骤，故避免了洗涤所造成的细胞损失。更重要的是，CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent的信号可耐受固定和透化。这允许了后续开展终点分析，或利用免疫细胞化学检测其他目的蛋白。此试剂适用于成像、高内涵分析/筛选、高通量筛选和流式细胞仪。索取资料

　　传统的凋亡研究大多是在单个时间点进行测定，然而，因为细胞是活体，其生物学和细胞进程是动态而非静态的，故记录细胞应答某些刺激(如药物处理或某种生长因子刺激)时所产生的动态变化可能更为关键。

　　罗氏应用科学部推出的xCELLigence系统则为凋亡通路的全盘观察打开了大门，让我们能够更深入地了解细胞中究竟发生了什么。xCELLigence是一种无需标记、同时又可对细胞进行实时监测的新型细胞分析平台。它利用检测电子传感器阻抗变化以反映细胞生理状态，从而对细胞进行无损伤地实时定量检测。细胞接种在96微孔E-plate中，在每个孔的底部有嵌入的微电子感应器。使用低电压(20mV)交流电在孔内产生一个离子环境，就能反映出细胞增殖、存活、凋亡、形态变化等细胞生物学状态。