动物源食品中四环素类兽药多残留测定实验

动物肝脏 肾脏 肌肉组织 水产品 牛奶

聚丙烯 乙二胺四乙酸二钠 甲醇-水 甲醇-乙酸乙酯 乙腈 三氟乙酸

聚丙烯离心管 固相萃取柱 高效液相色谱 串联质谱仪

1.  提取
 
动物肝脏、肾脏、肌肉组织、水产品：称取均质试样5 g（精确到0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，分别用约20 mL、20 mL、1O mL、0.1  mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液（0.1 mol/L。称取60.5 g乙二胺四乙酸二钠放入1625mL Mcllvaine缓冲溶液中，使其溶解，摇匀）低温超声提取三次，3000 r/min，5 min离心（温度低于15 ℃），合并上清液（注意控制总提取液的体积不超过50 mL），并定容至50 mL，混合，5000 r/min，离心10 min（温度低于15 ℃），过滤，待净化。
 
牛奶：称取混匀试样5 g（精确到0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解并定容至50 mL，旋涡混合1 min，低温超声10 min，冷却至4 ℃， 5000 r/min，离心10 min （温度低于15 ℃），过滤，待 净化。
 
2.  净化
 
准确吸取10 mL提取液以1 滴/s的速度过Waters Oasis HLB （60 mg，3 mL）固相萃取柱，待上清液完全流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水（5 + 95）淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5 min，最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯（10 + 90）洗脱。将洗脱液吹氮浓缩至干（温度小于30 ℃），用1.0 mL标准稀释液溶解残渣，低温超声5 min，过0.45 um滤膜，供高效液相色谱/串联质谱仪测定。
 
3.  5HPLC 测定条件
 
色谱柱：Inertsi1 C8-3，5 um，150  mm×2.1  mm；
 
流动相：甲醇，乙腈，0.01 mol/L三氟乙酸，洗脱梯度见表3-11（柱平衡时间5 min）；


 
流速：1.5 mL/min；
 
柱温：30 ℃；
 
进样量：30 uL。
 
4.  HPLC-MS/MS 测定条件
 
色谱柱：Inertsil C8-3，50 m，150 mm × 2.1 mm； 
 
流速：0.3 mL/ min；
 
柱温：30 ℃；
 
进样量：300 L；
 
流动相：甲醇 + 0.01 mol/L三氟乙酸。
 
离子化模式：ESI+ ；
 
质谱分辨率：单位分辨率；
 
雾化气（NEB）：6.0 L/min；
 
气帘气（CUR）：10.0 L/min；
 
喷雾电压（IS）：4500 V；
 
去溶剂温度（TEM）：500 ℃；
 
去溶剂气流：700 L/min；
 
碰撞气（CAD）：6.0 L/min（氮气）。