动物组织中金霉素残留测定的高效液相色谱柱后衍生反应

动物组织中金霉素残留测定的高效液相色谱柱后衍生反应研究

摘　要:建立了动物组织中金霉素残留测定的高效液相色谱柱后衍生法,研究了镁离子和草酸体系对金霉素荧光强度的影响。结果表明,镁离子浓度和草酸浓度为1∶1. 2 时,金霉素的荧光强度最强。动物组织样品以5 %高氯酸提取,正己烷脱脂,C18 净化, Hyper sil ODS C18 (250 ×4. 6 mm ,5 μm) 分离,流动相为甲醇∶0. 05 mol/ L 草酸= 80∶20(V / V ) ,流速为0. 7 mL/ min ,柱后0. 05 mol/ L 乙酸镁衍生,流速为0. 1 mL/ min , 紫外检测器和荧光检测器同时测定,提高了金霉素残留定量灵敏度。紫外检测波长365nm , 荧光检测波长λex = 360 nm ,λem = 520 nm。

    金霉素作为兽药已有50 多年的历史,目前仍然是常用的畜禽抗生素类药物。金霉素价格便宜,疗效好,但长期大量使用带来的残留问题时有发生。Okerman 等[ 1 ] 报道,有1. 2 %的鸡肉和2. 7 %的猪肉中检出金霉素残留。自上世纪80 年代科学家发现金霉素对格兰氏菌有高抑制作用以来,各国开始限制金霉素作为兽药使用,欧盟规定家禽和猪肉中金霉素最大残留限量(MRL) 为0. 1 mg/ kg ,我国规定猪肉中金霉素的MRL 值为0. 1 mg/ kg。
    金霉素的测定方法主要有酶联免疫分析( EL ISA) 法[1 ,2 ] 、高效液相色谱( HPLC) 法[3 - 6 ] 、液相色谱-质谱( HPLC2MS) 法[7 ,8 ] 、荧光光谱法[9 ,10 ] 和毛细管电泳法[11 ] 等。Tjornelund 等[12 ] 探讨了四环素族在金属离子络合作用下,毛细管电泳分离的影响因素。文献[13 - 15 ] 报道Ca2 + 、Al3 + 、Zr4 + 能与四环素络合并产生荧光。在四环素族抗生素的高效液相色谱法检测时,金霉素的出峰时间晚,峰拖尾严重,灵敏度较差。基于HPLC 柱后衍生测定金霉素残留的方法尚未见报道。
    本文建立了动物组织中金霉素与残留测定的HPLC 柱后衍生法,研究了镁离子和草酸体系对金霉素荧光强度的影响。由于荧光检测器只对荧光物质有响应,且灵敏度高,因此,通过HPLC 柱后衍生荧光法测定金霉素残留可大大提高检测灵敏度。