动物的选择与免疫
1．动物的选择 纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。
2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
初次免疫 抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml,0.2ml/点）
↓3周后
第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml）
↓3周后
第三次免疫 剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价）
↓2～3周
加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射）
↓3天后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。
初次免疫 1×107/0.5ml ip
↓2～3周后
第二次免疫 1×107/0.5ml ip
↓3周后
加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv
↓
取脾融合
细胞融合
1．细胞融合前准备
（1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。
表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系
| 名 称 | 来 源 | 耐 受 药 物 | Ig链 |
| H L | |||
| P3/X63-Ag8(X63) | BALB/C骨髓瘤MOPC-21 | 8-氮鸟嘌呤 | r1 K |
| P3/X63-Ag8.653(X63-Ag8.653) | P3/X63-Ag8 | 8-氮鸟嘌呤 | － － |
| P3/NSI-1-Ag4-1(NS-1) | P3/X63-Ag8 | 8-氮鸟嘌呤 | － K（不分泌型） |
| P3/X63-Ag8.Ul(P3Ul) | （X63×BALB/C脾细胞）杂交瘤 | 8-氮鸟嘌呤 | － － |
| SP2/0-Ag14(SP2/0) | （X63×BALB/C脾细胞）杂交瘤 | 8-氮鸟嘌呤 | － － |
| F0 | BALB/C骨髓瘤 | 8-氮鸟嘌呤 | － － |
| S194/5.XXO.BU.1 | P3/X63-Ag8 | 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 | － － |
| MPC11-45.6TG1.7 | BALB/C骨髓瘤MPC-11 | 6-巯鸟嘌呤 | r2b K |
| 210.RCY3.Ag1.2.3 | LOU大鼠骨髓瘤R210 | 8-氮鸟嘌呤 | － K |
| GM15006TG-A12 | 人骨髓瘤GM1500 | 6-巯鸟嘌呤 | r1 K |
| U-266AR | 人骨髓瘤U-266 | 8-氮鸟嘌呤 | ε λ |
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液 ，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，应定期用8-氮鸟嘌呤进行处理，使生存的细胞对HAT呈均一的敏感性。