原创|菌浓度摸不准怎么办？

　　培养基适用性检查是每个药企、医疗器械企业都会遇到的，很繁琐。但培养基企业提供的适用性报告又不能代替自己做的，很是让人头痛。

　　该检查会用到多种微生物菌种，以药企常见的TSA为例，某培养基厂家提供的检测报告用到了7种菌。

　　药典里没要求这么多，但也有好几种。这些微生物，刚从液氮或者冻干粉复融的需要预培养一代。在接种到样品培养基和对照培养基时，需要做计数。要求接种浓度小于100cfu。这里的操作药典一笔带过，留给新人是一堆烦琐事：

　　比如说我该怎么确定菌浓度？

　　在老版，应该是2005版药典中，还有麦氏比浊管做菌浓度的指导。就是把菌悬液和麦氏比浊管做比较，大约的得出一个浓度，但现在取消了这种方法。

（麦氏比浊管已经退出药典了，但在某宝上依然可以搜到，感兴趣的可以试试。）

　　新人往往陷入一种误区，“我要先涂平板培养，得出我的菌浓度，然后选择合适的那个浓度来接种到样品和对照培养基上。”想法很好，实操性很差。

　　毕竟，等你培养好了，几天都过去了。而且药典里还很明确的规定，“菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃可在24小时内使用，黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。”

　　这预示着，你的方法行不通，因为24小时内，你的菌落可能都没冒头。尤其是黑曲霉之类的，三天才可能刚刚形成菌落。怎么办？应该验证保存期限？嗯，绕进死胡同了。

　　我的“笨”办法↓↓

　　其实完全可以这样，我把微生物培养好后，直接取菌悬液按1:10、1:20、1:40、1:80---系列稀释后（具体该从多少倍稀释，完全可以根据个人经验与喜好），每个浓度都接种到样品培养基和对照培养基上。这样只要有一个浓度是合适的，我的结果就可以用了。至于是其他的不适合的浓度，直接排除掉。

　　我想您应该不会从1:10：1:20系列稀释到1:1000吧，这样老板会气疯的，毕竟以TSA对照培养基为例，300ml的量为一袋，而300毫升最多可以倒20个平板。而一袋的价格已经超过七八十块了。当然，R2A琼脂对照培养基更贵，一袋300ml配制量，卖一百多。如果稀释的倍数太多，导致对照培养基消耗量超过预算，我可不负责的哈。

刚刚在某宝搜了下价格，对照培养基确实不便宜。

　　我们一般选取菌落数在50-100之间的。太少了，容易有偏差。20个相差2个，和80个相差2个，比例对比差太多了，所以最终菌落数目千万不要太少。当然，这样做会浪费对照培养基，但考虑到多次开启洁净室空调及其生物安全柜的电费，还有人工时间成本，这样做其实非常经济实用。