1、从RNA（或mRNA）反转录合成cDNA第一链：
2、于95℃加热5～10min，灭活反转录酶，使RNA—cDNA杂交体变性，然后迅速冰浴冷却：
3、PCR扩增：方法基本同PCR。
cDNA第一链合成方法：20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液，2ul；四种dNTP（10 mmol/L）2ul；RNA酶抑制剂20U；mRNA，l～2ug（或RNA 5-10ug）；AMV，20U；引物，1u；最后用灭菌水补至20ul。 以上溶液充分混匀后，于42℃反应60min，反应完毕后将反应管在95℃下加热5min，使反转录酶失活和RNA—cDNA杂合物变性。其后反应液则可置于-20℃下保存备用。