叶明亮研究员：蛋白质组修饰谱分析新方法

中国科学院大连化学物理研究所 叶明亮研究员

        2014年4月26日，首届全国质谱分析学术研讨会在北京西郊宾馆盛大开幕。来自中国科学院大连化学物理研究所的叶明亮研究员为大家带来题为《蛋白质组修饰谱分析新方法》的报告。翻译后修饰大多发生在具有重要生理调控功能的低丰度蛋白质分子上，其分析鉴定面临诸多技术上的挑战。为此叶明亮研究员课题组发展了多种蛋白质组修饰谱分析的新技术新方法。叶明亮研究员就修饰蛋白质组学的快速分析、规模化分析、精致分析和底物筛选四个方面所做的工作进行了介绍。

　　一、快速分析

　　为了实现样品预处理步骤的优化与集成化，建立了超快磷酸化蛋白质组样品的处理方法，该方法只需25分钟即可完成富集，相对于传统方法的16个小时，大大节省了工作时间。据叶研究员介绍，他们是通过使用高浓度的胰蛋白酶和使用高特异性的富集方法来实现的。

　　二、规模化分析

　　通过结合多酶酶切策略，亲水作用色谱和酰肼化学两种富集方法建立了一种用于复杂生物样品中N-糖基化蛋白质组的大规模鉴定系统，很大程度上提高了糖基化蛋白质组的蛋白覆盖率。叶研究员课题组将该系统用于人肝样品中N-糖基化蛋白质的鉴定，共鉴定到了14498条N-糖基化肽段，对应2210个糖基化蛋白质和4793个N-糖基化位点。这是迄今为止数目最大的人源糖基化蛋白质组数据集。

　　三、精致分析

　　通过特异性的化学反应与内切糖苷酶酶切，实现了对糖链结构上同时含有末端唾液酸和核心岩藻糖糖基化位点的富集，使得高通量的异常糖基化质谱分析成为可能。

　　四、底物筛选

　　为了通量化筛选激酶底物，建立了一种高通量的整合的激酶底物筛选磷酸化蛋白质组平台，并成功的应用于CK2激酶底物的筛选。