叶绿素(chlorophyll，chl)含量测定

实验原理

叶绿素含量测定是植物生理研究常做的实验之一, 测定结果可为农作物的科学施肥或其它农业措施以及植物病理的诊断等提供科学依据。叶绿素含量测定可采用目视比色法和分光光度法, 两者相比, 后者比前者具有更高的精度, 而且能在未经分离的情况下分别测定叶绿素a、b的含量。叶绿素总量是以Wintermans及DeMots（1965）提出的公式（6.10×A665nm＋20.04×A649nm）计算。

试剂和器材

一、试剂

无水乙醇；95％乙醇；

50 mmol/L磷酸缓冲溶液（pH 6.8）。

二、材料

新鲜植物叶片

三、器材

研钵、分光光度计。

操作方法

一、叶绿素提取

取少量新鲜植物叶片,以2 mL 磷酸缓冲溶液（50 mmol/L, pH 6.8）将其研磨成均质。吸取40 mL上清液，注入1.5mL eppendorf 管中，再加入960 mL无水乙醇，置于4℃黑暗下30分钟。然后于4℃下以1000 g离心15分钟，以分光光度计分别测定665 nm、649 nm波长处吸光值，以95％乙醇做空白。

二、计算

叶绿素总量＝6.10×A665nm＋20.04×A649nm

叶绿素含量是以每克鮮重含有叶绿素的毫克数（mg g-1）表示。

注意事项

叶绿素易被强光和热破坏，实验操作易在黑暗和低温条件下进行。