多肽合成药物的基因重组技术

基因的表达包括相应的mＲNA合成( 转录) 和蛋白质合成( 翻译) ， 在微生物体内进行外来基因的蛋白质生物合成依赖于微生物遗传物质和编码目标蛋白的重组DNA片段。具体步骤如下: 第1步，从供体中分离出编码蛋白的DNA片段; 第2步，将DNA分子插入到表达载体上; 第3步，将载体转染到宿主体内; 第4步，培养宿主组织，进行基因的扩增，mＲNA合成和多肽合成; 第5步，纯化重组多肽。通常根据宿主细胞的不同将多肽药物重组技术分为两类: ( 1) 多肽药物的真核表达; ( 2) 多肽药物的原核表达。

1 多肽合成药物的真核表达

真核表达的多肽具有定向性强、产品安全卫生、原料来源广泛和成本低等优点，可以得到质量高、疗效好的且活性与天然多肽相当多肽类药物。目前，真核宿主细胞主要有酵母菌、动物和昆虫细胞等，而酵母菌在真核表达中最常用。Cao等利用毕赤酵母细胞成功地表达了鸡 b－防御素6( AvBD－6)和脱半胱氨酸的AvBD－6－B生物活性肽，并在试验中发现二者均具有较强的抑菌作用。Guo等同样成功地在毕赤酵母细胞中表达了抗菌肽D，该多肽具有较强的抑菌作用，抗菌肽D的酵母表达对抗菌药物的发展具有重要的指导意义。苏彩霞等将乙型肝炎表面抗原( HBsAg) 基因前连接酿酒酵母信号肽，并将整个序列优化为汉逊酵母优选密码子，通过PCＲ技术进行合成，最终在汉逊酵母中成功地表达了重组HBsAg。

2 多肽合成药物的原核表达

原核表达系统中所应用的宿主细胞包括大肠杆菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌等，其中大肠杆菌为最常用的原核宿主细胞。利用原核表达重组技术，可以大量高效地合成多种生物活性多肽，即可通过设计合适的DNA模板来控制多肽的序列，为多肽合成药物的基因合成奠定了基础。 Li 等在原核细胞BL21( DE3) pLysS中成功地表达了ChickenIFN－y ，并通过体外实验证明了ChickenIFN－y 具有较强的抗病毒活性，是原核宿主细胞应用于多肽合成的范例。Lu等利用重组技术将水蛭素基因与小泛素相关修饰物( SUMO) 融合，最后在大肠杆菌中高效地表达了水蛭素( HV1) 亚型。传统的花生油提取工艺主要采用高温压榨法和有机溶剂浸提法，这两种方法由于其中的花生蛋白在高温下严重变性或者是有机溶剂的残留问题，不能够充分地被利用，张友维等利用重组技术成功地在枯草芽孢杆菌中发酵制备了花生多肽，提高了花生蛋白的利用率。