多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测特定基因的过度表达。
一、细胞总RNA提取
1. 收集约5×107个细胞,冷PBS洗涤。
2. 加入400 ul RNA提取液(含6 mol/l 的异硫氰酸肽,0.5%十二烷基肌酸钠,0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0,0.25 mol/l 乙酸钠,pH4.0,0.5%二疏基乙醇,50%萘酸),混匀。
3. 加入400 ul 氯仿,混匀,以13 000 r/min 于4℃离心15 min。
4. 取上清液加入等体积的异丙醇,4℃放置30 min。
5. 然后以13 000 r/min 离心15 min,吸上清,将RNA成点用75%的乙醇洗涤1次,溶于100 ul 的无菌双蒸馏水中。
6. 并用紫外分光光度计检测RNA纯度(A260/A280应为1.8~2.0)后备用。
二、反转录及PCR扩增
1. 引物
2. 取细胞总RNA10 ul 加入20 ul AMV逆转录酶反应体系中,42℃保温30 min 进行反转录,合成cDNA。
3. 然后置95℃,3 min 终止反转录。
4. 接着在Taq酶的作用下,用mdr-1和β2-MG引物,对cDNA上的目的片段进行PCR
5. 94℃预变性2 min,然后94℃变性1 min,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,扩增35个循环。
6. zui终在60℃保温7 min,以保证产物充分延伸。
一、项目基本情况项目编号:GDYD240133项目名称:呼吸道多重(23重)病原体核酸检测试剂盒(荧光PCR法)采购方式:公开招标预算金额:1,904,400.00元采购需求:合同包1(呼吸道多重(2......
为便于供应商了解采购信息,根据《物资服务集中采购需求管理暂行办法》等有关规定,现将的采购意向公开如下:采购项目名称:业务相关仪器设备采购项目。序号需求概况预算金额(万元)预计采购时间1采购内容:气相色......
PCR检测——ISO标准发布近日,由上海海关主导制定的2项ISO标准正式获得国际标准化组织(ISO)通过并发布。这两项ISO标准是:《ISO/TS20224-10:2024分子生物标记分析——食品和饲......
近期,安图生物先后获国家药品监督管理局、河南省药品监督管理局颁发的新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂盒(磁微粒化学发光法)、抗线粒体M2抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)、人CYP2......
为便于供应商及时了解政府采购信息,根据《财政部关于开展政府采购意向公开工作的通知》(财库〔2020〕10号)等有关规定,现将山东省公共卫生临床中心(省胸科医院、济南市传染病医院)2024年02(至)1......
2月3日,新华社受权发布的《中共中央国务院关于学习运用“千村示范、万村整治”工程经验有力有效推进乡村全面振兴的意见》(简称《一号文件》),对生物育种产业化提出了新的要求和期待。文件明确提出,要推动生物......
全球动植物种质资源鉴定评价及确权交换中心项目-综合测试基地建设用地面积约200亩,其中规划可建设用地面积约21.6亩。包括新建一级测试圃六万余平方米,二级测试圃(二级隔离网室及温室)三万平方米,三级测......
山东大学荧光定量PCR仪采购招标项目的潜在投标人应在山东大学采购网(http://www.cgw.sdu.edu.cn/)获取招标文件,并于2023年12月22日14点30分(北京时间)前递交投标文件......
近日,忻州市市场监督管理局批准发布《PCR实验室医疗废弃物处置规程》。2023年10月13日发布,2023年12月13日开始实施。1、范围本文件规定了PCR实验室医疗废物处置的术语和定义、处置程序、技......
2023年11月1日,沈阳市第六人民医院发布《辽宁省传染病医疗救治中心一期附属配套工程医疗设备招标公告》项目公告,预计花费14447460.00元采购医疗设备。详细信息如下:一、项目基本情况项目编号:......