大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验

病毒

PEGNTE

转子离心机

1.  制备病毒原液。加5 mol/l NaCl至病毒原液中，4℃不断搅拌，至终浓度达到0.4 mol/l。

2.  缓慢加入PEG 6000至终浓度8.5%，4℃持续搅拌1~1.5 h。

3.  7000 g 离心10 min，用原病毒体积1%的NTE缓冲液溶解沉淀。直接使用或贮存于-70 ℃或-80℃。

4.  准备好Sepharose CL-4B或CL-2B柱子，用NTE缓冲液平衡。对于来自100 ml 病毒原液的沉淀用10 ml Ecomo-柱。

5.  加病毒，用NTE缓冲液以1 ml/min 进行层析，收集0.3~0.5 ml 各组分。

6.  用测定280 或260的光吸收或反转录病毒分析法分析各组分，将适当的组分合并并进行滴定。