天然培养基包括:血清、组织提取液、如鸡血浆,鸡胎汁等。其中血清是一种仍在广泛应用中的天然培养基,市场有产品出售。而血浆应用较少,因此用时多自己制备。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。(北京出版社)
实验方法原理 | 鸡血浆为最早用于培养的液体,含有纤维蛋白原和一定的营养成分,当与鸡胚胎汁混合后,能发生凝固,构成细胞生长的环境,利于细胞向三维空间生长,缺点是易于液化。因制备血浆后不再做无菌处理,全过程必须在严密无菌条件下进行。 |
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实验材料 | 雄鸡 |
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试剂、试剂盒 | 肝素生理盐水酒精 |
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仪器、耗材 | 手术架棉球注射器离心机 |
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实验步骤 | 利用生长一年左右体大、健壮的雄鸡,采血压计前一天禁食,多喂水。
制备方法如下:
1. 肝素溶液制备
配制浓度20 mg/100ml 生理盐水肝素液,9 磅10 分钟高压或滤过灭菌,每小瓶中分装入0.5 ml 贮4 ℃冰箱中备用; 2. 动物准备
缚鸡于手术架上,令仰卧,从鸡翅取血;展开鸡翅,拔除翅根局部羽毛,选血管粗大部位,碘酒和酒精棉球消毒;
3. 采血
取20 ml 无菌注射器,先吸入肝素液少许,湿润注射器内壁后,用16号针头刺入静脉,吸血10 ml,立即注入离心管中,摇匀;
4. 分离血浆
3000 转/分 离心10 分钟后吸出上清血浆,分装入小瓶中,-20 ℃冰箱贮存备用。
也可采用从鸡的心脏穿刺取血,方法是从锁骨上窝部进针,直接穿入心脏;取血量大而快,用此法采血亦可。 展开 |
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