富集活细胞

细胞悬液 D-PBSA

Ficoll-Hypaque溶液或其他类似物

离心管或常规容器 生长培养基 注射器 移液管 细胞计数器 离心机

1. 让悬液中大的组织团块沉降。

2. 把 9 ml 的细胞悬液（细胞团尽量少）加在6 ml 的Ficoll （Ficoll/metrizoate 调至 1.077 g/ml）泛酸溶液上面，此步骤应在广口、透明有盖的离心管中进行，如 25 ml 无菌离心管或Nunclon 普通容器（清澈光亮的离心管或常规容器），或 Corning 50 ml 透明的塑料管，体积应两倍于上述溶液的体积。

3. 400 g (在界面中间测量），离心15 min 。

4. 小心吸去上层液体勿破坏界面。

5. 用注射器（带有钝的插管或平针头）或巴斯德吸管或移液器小心收集交界面液体。

6. 用培养基（如 DMEM/F12 , 含1 0 % 胎牛血清）将混合液稀释至 20 ml。

7. 混合液以 70 g 离心 10 min。

8. 去除上清液，用 5 ml 生长培养基重悬细胞小团。

9 . 重复步骤 7 和 8 使细胞不含密度培养基。

10. 用血球计数板或电子计数仪计数细胞。

11. 接种至培养瓶中培养。

使用人的或其他灵长类的材料，不要用尖针或玻璃巴氏吸管。