实验概要
本文介绍了彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）的原理及操作步骤。
实验原理
彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应，将银颗粒氧化成溴化银，后者与彩色显影剂起还原反应，生成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料，并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，不会发生非特异性背景染色。
实验步骤
1. 石蜡切片常规脱蜡至水。
2. 0.1%胰蛋白酶37℃消化20min，或抗原修复20min（98℃），自然冷却至室温。
3. 0.05mol/L（pH7，4）TBS洗3×3min。
4. 1%EA（卵蛋白）15min，不洗。
5. 适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h，或37℃孵育1h。
6. 0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×5min。
7. 0.02mol/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min。
8. 1%EA 15min，不洗，1:10-1:20稀释的PAGlonm室温孵育1h，或37℃孵育30min。
9. 0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min。
10. 1%戊二醛洗10min。
11. 双蒸水洗5min。
12. l%明胶洗5min。
13. 银避光显影（见银显影剂配方）8~15min。
14. 双蒸水洗15min。
15. 固定：用显影定影液（1:4或1:10）固定5min，也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1-3min，或用1%戊二醛固定5min，温水洗3~6min。
16. 漂白：用2%铁氰化钾和1%溴化钾洗10min，双重蒸馏水洗5min。
17. 彩色显影：用。-萘酚或菲尼酮或碱性品红显色2-4min，双重蒸馏水洗5~10min。
18. 固定：2%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠洗5min。
19. 流水冲洗。
20. 缓冲甘油封片，观察。