微生物常见检测方法汇总（二）

商业化快速微生物检测法

微生物的检测，其发展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多生物制品公司利用传统微生物检测原理，结合不同的检测方法，设计了形式各异的微生物检测仪器设备，正逐步广泛应用于医学微生物检测和科学研究领域。例如：1、抗干扰培养基和微生物数量快速检测技术2、BACTOMETER 全自动各类总菌数及快速细菌检测系统

这些仪器和设备的生产厂家很多，产品各异，在此不做一一介绍，具体可查看各公司的产品说明。

在微生物检验操作过程中，要保证检测环境(如超净台、检测室)以及所用工器具的洁净程度，同时保证人员各种操作的规范性，尽量保证其无菌性，防止因人为原因操作失误而出现误差结果，同时在适宜温度进行培养，为合理决策和指导生产提供依据。为保证检测结果的准确性，我们应做好以下几个方面。

培养基的灭菌及使用

1.每次配制时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。

2.培养基配制时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。

3.一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。4.灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效的灭菌时间。

5.灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。

6.在使用时，要根据当班次的使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水浴温度(先化好的可从水浴取出，放在水浴锅锅盖上)待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。

7.做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死;也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。

8.每瓶培养基均要做空白。

9.尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。

10.培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。

检测环境的维持

1、大环境(检测室)(1)检测时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境(最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作)。

(2)如果在原来的原料微生物检测室进行检测，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。

2、小环境(超净工作台)1.定期清洁初效过滤器，要及时更换。

2.检测前，将超净台内部进行清洁，用 75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。

3.关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。

4.每次检测后，要对超净台内部进行清理、清洁，并用 75%酒精进行擦拭消毒。

5.紫外灯根据其使用寿命要及时更换。

6.检测同时，要做上相应菌落检测的环境空白。

7.检测区域的选择：a、一般在距离超净台外沿的 1/3-2/3 区域进行无菌操作;b、要在酒精灯火焰的外焰保护区域进行操作。

工器具的洁净度

1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。

2.检测用剪刀、勺子等物品要做到检测专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。

3.接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌，但要注意检测时要先将接种针(环)进行冷却。

样品的采集及检测

1、保证采样器具的无菌性(1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够(但不可时间过长，容易导致玻璃器皿易裂纹而报废)。

(2)取样筐：使用前要用75%酒精进行喷洒消毒。

(3)取样勺：要保证其清洁消毒，清洁后用75%酒精进行擦拭消毒。

(4)取样袋：可先用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。

(5)电子称表面用 75%酒精消毒。

2、人员操作(1)保证手部的清洗、消毒：取样前及检测前都要先洗手再消毒。(2)取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。(3)取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。(4)在要求的检测区域进行操作。(5)检测前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。(6)往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。(7)样品计量要准确，稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉)，进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品从管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。(8)盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，会将部分微生物烫死;也不能温度太低，不能将样品溶解完全。(9)进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。(10)倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中易干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。(11)做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。(12)接二步时，要注意先将接种针(环)进行冷却，避免出现接不上菌落的情况，导致无法判断、确认。(13)检测完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。

微生物的培养

1.在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。2.要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。

思考与讨论

微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。