新鲜手术取得或冻存的组织于37 ℃ 快速复温,原代细胞培养工作液清洗3次,尽量修剪去除纤维组织,将组织块剪成约1 mm3大小的小块,弯头吸管吸取组织块均匀种植于75 cm2 培养瓶瓶底,瓶内加入少量原代细胞培养工作液,小心翻转培养瓶使组织块黏附于瓶底,置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养6-8 h,待组织贴壁后,正置培养瓶,补加适量培养液继续培养。每日定时观察细胞生长状况,记录细胞生长满瓶时间,并收集培养细胞送病理学检查。
①酶消化法纯化肿瘤细胞:当组织块培养15-20d后,组织块(包括无活性的肿瘤细胞、破碎细胞和成纤维细胞等)自动脱落。取出培养瓶,弃掉培养基和漂浮的组织块,用5 mL PBS 洗涤一次。加 1.5 mL 0.25%的胰酶,前后旋转培养瓶4-5次,使胰蛋白酶包被所有瓶内细胞,放入37 ℃细胞培养箱中2 min。取出培养瓶在倒置显微镜下观察,可见部分细胞首先变圆、脱落被消化下来,这时停止消化。这些首先被消化下来的细胞为成纤维细胞,吸除成纤维细胞及消化液。加入5 mL培养液,用吸管吹打细胞,收集细胞悬液。离心后弃上清。加入PBS 洗涤细胞沉淀,再离心弃上清,再加入培养液后接种于培养板中继续培养。
②机械刮除法纯化肿瘤细胞:用不锈钢丝末端插橡胶刮头或裹少许脱脂棉制成,高压灭菌后备用。用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位;弃掉培养液,把无菌胶刮伸入瓶皿中,肉眼或显微镜下,刮除无标记空间;再用PBS冲洗1-2次,洗除被刮掉的细胞;继续培养,如发现成纤维细胞残留,重复刮除至完全除掉为止。
近日,中国农业科学院饲料研究所科研人员研究创新了一种简单、快速的鸭胚肝脏原代细胞分离和培养方法,并研究了鸭胚肝脏原代细胞胆碱缺乏模型中的基因可变剪切,为鸭胆碱与基因结构的相关性研究提出了新的见解。相关......
一、贴壁细胞的消化法传代1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发......
取人或动物体内(或胚胎)的组织,将其剪碎至1mm3的组织块,再采用的如下方法进行分离培养:一、悬浮细胞的分离方法1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。2、......