有机磷农药残留测定实验

有机磷农药（organophosphorus pesticides，简称OPPs）是含有C一P键或C—O—P、C—S—P、C—N—P键的有机化合物，目前常用的有四大类：
 

1.  磷酸酯类磷酸中3个氢原子被有机基置换后生成的化合物称磷酸酯。
 

2.  硫代磷酸酯类磷酸分子中的氧原子被硫原子置换后生成的化合物为硫代磷酸，硫代磷酸中的氢原子被有机基取代 ，即成为硫代磷酸酯。
 

3.  膦酸酯类和硫代膦酸酯类磷酸中的一个羟基被有机基置换!即在分子中形成P—C键的称为“膦酸”，膦酸中羟基的氢原子再被有机基取代即为膦酸酯，或膦酸酯中的氧原子再被硫原子取代，即为硫代膦酸酯。

4.  磷酰胺和硫代磷酰胺类磷酸分子中的羟基被氨基置换，生成磷酰胺；或磷酰胺分子中剩下的氧原子被硫原子替换，即成为硫代磷酰胺。

粮谷 油籽

丙酮 二氯甲烷 氯化钠水溶

具塞锥形瓶 抽滤瓶 凝胶色谱柱 分液漏斗 馏分收集器

1.  提取

方法1 （均质提取）称取试样约20 g（精确0.1 g）至于250 mL具塞锥形瓶中，加入20 mL水，混摇后放置1 h。然后加入100 mL丙酮，高速均质提取3 min。将提取液抽滤于250 mL梨形瓶中。残渣再用50 mL丙酮重复提取一次，合并滤液，于40 ℃水浴中旋转浓缩至约20 mL，待净化。

方法2 （ASE快速溶剂提取）称取试样约20 g （精确至0.1 g）于样品池中， 密闭，按规定的条件[ASE提取条件提取溶剂：二氯甲烷；压力：1500 psi (l psi= 6894.76 Pa)；温度：50 ℃ ；提取体积：60 mL；静态时间：5 min]进行提取、净化。

2.  液-液分配净化

将浓缩提取液转移至250 mL分液漏斗中，加入150 mL氯化钠水溶液和50 mL二氯甲烷（ASE提取无需加二氯甲烷），振摇3 min，静置分层，收集二氯甲烷相。水相再用2×50 mL二氯甲烷重复提取两次，合并二氯甲烷相。经无水硫酸钠柱脱水，收集于250 mL梨形瓶中，于40C水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL环己烷-乙酸乙酯（1 + 1）以溶解残渣，并用0.45 um滤膜过滤。将5 mL待净化液用GPC净化。

3.  凝胶色谱净化

合并馏分收集器中的收集液于500 mL梨形瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入2 mL正己烷以溶解残渣，待SEP净化。

凝胶色谱（GPC）条件净化柱：700 mm×25 mm, Bio BeadsS-X3, 或相当者；流动相：环己烷-乙酸乙酯（1 + 1）；流速：5.0 mL/min；样品定量环：5.0 mL；预淋洗体积：50 mL；洗脱体积：200 mL；收集体积：90〜190 mL。

4.  固相萃取净化
 

用6 mL正己烷预淋洗活性炭固相萃取柱，将样液倾入活性炭固相萃取柱中，用2 mL正己烷洗涤，然后用20 mL正己烷-乙酸乙酯（2 + 3） 进行洗脱。收集全部洗脱液于50 mL梨形瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至干，用正己烷溶解并定容至2.0 mL，供气相色谱-质谱测定和确证。

5.  测定

电离方式：EI；电离能量：70 eV；测定方式：选择离子监测方式； 溶剂延迟：5 mD；

多种有机磷农药残留分析，目前普遍采用气相色谱火焰光度检测器法（GC- FPD）测定，该方法灵敏度高，分离效果好，定量准确。经过多年实践运用，己经证明是一种经典适用的分析方法。但在气相色谱分析中，干扰物与待测物在同一根色谱柱具有相同保留时间的现象经常发生，特别是对污染物的不明样品更容易造成假阳性。因此，气相色谱/质谱选择离子法（GC-MSD）来进行确证是解决这一问题的有效手段。Stan报道了23种有机磷化合物的PICI和EI质谱图，并证实了它们在食品中 ng/g量级的存在。EI方式下化合物的分子离子峰较弱，或没有分子离子峰。在PICI方式下,与EI相比,所有化合物都有强的M+1离子峰。最近, Richardson和Seiber用EI质谱来确认接触地亚农和对硫磷的鸽子的肝和肾中的有机磷代谢物（二甲基磷酸酯、二乙基磷酸酯、二甲基硫代磷酸酯、二甲基二硫代磷酸酯、二乙基硫代磷酸酯、二乙基二硫代磷酸酯）的存在。这些化合物是作为丁基衍生物用GC-MS分析的。

目前国内外己有不少应用气相色谱分析有机磷农药的报道，尤其对水果（蔬菜等样品中有机磷农药残留量的气相色谱法研究较多），但有关脂肪类食品的气相色谱法检测方面的文献报道较少，仅美国公职分析化学家协会制定的官方分析方法和国内卫生部制定的国标法在测定肉（鱼）中有机磷农药时采用了气相色谱法。

对气相色谱不能检测的高沸点或热不稳定、易裂解变质的有机磷农药都可以采用HPLC法来检测。AOAC中有近半数的有机磷农药都建立了HPLC法，研究报道也较多。如Paul Zavitsanos对17种有机磷农药LC/MS测定有机磷的条件进行了研究。