四、发光免疫分析：发光免疫分析：直接用发光物质标记抗原或抗体
生物的发光剂：荧火虫荧光素（酶催化发光）
化学的发光剂：鲁米那、吖啶脂等在有过氧化氢的弱碱溶液中即可迅速发光。
美国CHIRON公司生产的ACS-180使用类均相的包被抗体的磁性微粒，扩大了反应面，加速了免疫反应，又应用吖啶脂作标记的化学发光分析，此方法由于不用酶，避免了许多影响因素，又无催化剂，只要改变pH即可使标记物发光，故大大提高了检测速度，平均每一反应仅需7.5分钟，每小时可做180次分析。
五、时间分辨荧光免疫分析技术
用稀土元素和镧系元素中的铕(Eu)、铽(Tb)、钐(Sm)和镝(Dy) 四种元素的螯合物作标记，因为只有这四种元素能发射离子荧光。
1、铕、钐的荧光特点：
峰移大：Eu 离子或Sm 离子经激发后，其激发光与发射光的光峰之间有一个很大的峰移(stoke shift)，大约有290nm, 发射光谱为
615nm或643nm，而激发光谱为337nm，不会相互重叠。
发射光谱范围相当窄：特异性强，荧光测量可以在非特异性信号影响极小的波长进行，信噪比高。
射峰很陡峭：检测装置能调到非常精细的极限，从而易于区分不同的镧系元素螯合物的发射信号，便于作双标记。
荧光半衰期长：正常非特异性背景荧光的生命期是0·01微秒。铕螯合物的发射荧光衰变期超过430 微秒，钐螯合物为41微秒。
2、基本原理
由于铕、钐螯合物的紫外激发荧光、强度高、衰变时间长。而自然本底荧光较弱、衰变时间短。因此，采用激发后延时，使自然本底荧光完全衰变后再测量，即可排除背景光的干扰。即所谓的时间分辨荧光免疫分析（Time-Resolved
Fluoimmunoassay,TRFIA）
由于镧系元素络合物在水中的荧光很弱，加入增强溶液后，Eu离子或
Sm离子可以从此络合物中解离出来形成新的络合物，此新的络合物在紫外光激发下，能产生延续时间更长的一定光峰的荧 光。
即所谓的分解－增强－镧系荧光免疫分析 （Dissociation、 Enhanced Lanthanide Fluoimmunoassay,
DELFIA)。
目前国内使用的为芬兰生产的设备和试剂。采用LKB分析系统以聚苯乙烯微孔条作固相载体。以聚羧基酸螯合剂作为Eu离子或 Sm离子连接 抗体或抗原的分子桥。荧光增强液在PH3.2下分解Eu 离子与二酮体 螯合剂形成新的螯合物与其他成份构成微粒胶囊复合物。
3、测量过程
激发光激发时间≤1微秒，波长340nm
延迟测量时间： 400微秒
测量时间400微秒
进行下周期测量 前恢复时间200微秒
测量每周期约需时间１毫秒
每孔测量时间１秒 (约1000个周期)
4、TRFIA与常用标记检测技术(RIA、EIA)的比较：
标准曲线量程宽
灵敏度高10 12 ~ 10 15 g
重复性好：检测1000次/秒 或16次/秒的测量均值，信息利用率高
试剂效期长：至少6个月
应用范围广(通过固相TRFIA 通用标记技术)
六、电化学发光：Electrochemilumiscence（ECL）
利用电极板上的氧化还原反应引起化学发光（德国BM公司）
用稀土元素钌（ruthenium）作标记
磁颗粒作B/F分离
可测量程达4个数量级
结果稳定
七、免疫反应体系
标记免疫检测中的免疫反应原理相同，但被检物的检测方法有所不同：有双位点夹心法、固相抗原竞争法、固相抗体竞争法、BAS增强双位点夹心法等。
1、竞争性标记免疫检测常用于测定半抗原类物质，如：
血清雌二醇(E2)，孕酮(P)，睾酮(T)
甲状腺素，前列腺素类化合物
地高辛等
2、非竞争性标记免疫检测常用于测定蛋白类化合物，如：
促甲状腺激素(TSH)
垂体泌乳素(PRL)
卵泡刺激素(FSH)
黄体生成素(LH)
绒毛膜促性腺激素(hCG)
胰岛素(Insulin)
痰胚抗原(CEA)
甲胎蛋白(AFP)等