实验概要
熟悉氨基酸主要的化学性质;了解蛋白质的基本结构和重要的化学性质;掌握鉴别氨基酸和蛋白质的方法。
主要试剂
1. 蛋白质溶液
2. 5%硫酸铜
3. 0.5%甘氨酸
4. 0.5%酪氨酸
5. 米隆试剂
6. 0.5%苯丙氨酸
7. 饱和硫酸铵
8. 5%碱性醋酸铅
9. 1%硫酸铜
10. 0.5%苯酚
11. 5%甘氨酸等
主要设备
1. 常用仪器
2. 水浴锅
实验步骤
1. 盐析试验
取一支试管,加入蛋白质溶液20滴,再加入20滴饱和硫酸铵溶液,振荡后析出蛋白质沉淀,溶液变混浊。取混浊液10滴于另一试管中,加入蒸馏水2mL,振荡后观察现象。
2. 醇对蛋白质的作用
取10滴蛋白质溶液于试管中,加入10滴95%乙醇,振荡,静置数分钟 ,溶液混浊,取混浊液10滴滴于另一试管中,再加入蒸馏水1mL,振摇,观察现象,与盐析结果比较。
3. 蛋白质与重金属盐作用
取2支试管,各加入蛋白质溶液10滴,再在其中一支试管中加入5%碱式醋酸铅溶液1滴,另一支试管中加入5%硫酸酮溶液1滴,立即产生沉淀(切勿加过量试剂,否则,沉淀又复溶解)。再用水稀释,观察沉淀是否溶解,与盐析结果作比较。(本试验可用5%甘氨酸溶液作对比试验)
4. 蛋白质与生物碱试剂作用
取2支试管,各加入l0滴蛋白质溶液和2滴醋酸,一管加入饱和苦味酸2滴,另一管加入5%单宁酸2滴。观察有无沉淀生成。
5. 茚三酮试验
取2支试管,分别加4滴蛋白质溶液和4滴0.5%甘氨酸溶液,再分别加入3滴0.1%茚三酮溶液,混合后,放在沸水浴中加热1-5分钟,观察并比较两管的显色时间及颜色情况。
6.二缩脲试验
取2支试管,分别加入10滴蛋白质溶液、0.5%甘氨酸溶液,再各加入l0滴10%氢氧化钠溶液,混合后,再分别加入1-2滴1%硫酸酮溶液(勿过量)振荡后,观察现象,比较结果。
7. 黄蛋白试验
取一支试管,加入5滴蛋白质溶液及 2滴浓硝酸,出现白色沉淀或浑浊,然后加热煮沸,观察现象,反应液冷却后再滴入10%氢氧化钠溶液至反应液呈碱性,观察颜色变化。
8. 米隆 (Millon)试验
取4支试管,分别加入20滴蛋白质溶液,10滴0.5%苯酚溶液,10滴0.5%酪氨酸溶液和 10滴 0.5%苯丙氨酸溶液,再分别加入5-10滴米隆试剂,振摇,观察现象。再将试管置于沸水浴中加热 (不要煮沸,加热勿过久,否则颜色消退),再观察现象。
9. 蛋白质的碱解
取1mL蛋白质溶液放在试管里,加入2mL30%NaOH溶液,把混合物煮沸2-3分钟,此时析出沉淀,继续沸腾时,沉淀又溶解,放出氨气(可用红色石蕊试纸放在试管口检出之)。
向上面的热溶液中加入lmL 1O%硝酸铅溶液,再将混合物煮沸,起初生成的白色氢氧化铅沉淀溶解在过量的碱液中。如果蛋白质与碱作用有硫脱下,则生成硫化铅,结果清亮的液体逐渐变成棕色。当脱下的硫较多时,则析出暗棕色或黑色的硫化铅沉淀。
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