HPLC法
气相色谱/质谱检测法
实验材料 | 动物组织 |
---|---|
试剂、试剂盒 | 乙酸乙酯 丙酮 甲醇 乙腈 |
仪器、耗材 | 离心管 鸡心瓶 SCX柱 |
实验步骤 |
1. 提取
称取5 g(准确至0.01 g)样品于50 mL离心管中,加入20 mL乙酸乙酯,均质1 min后,超声提取5 min,再以3000 r/min的速度离心10 min,取上清液转移至鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并上清液于同一鸡心瓶中。
2. 净化
将提取液于40 ℃下旋转蒸发至近干(不能全部蒸干),用5 mL乙酸-乙酸乙酯(5 + 95)溶解,将溶液转移到预洗过的SCX柱上的贮液器中,再用 5 mL乙酸-乙酸乙酯(5 + 95)洗鸡心瓶,洗液一并转移到SCX柱【经5 mL乙酸-乙酸乙酯(5 + 95)预洗】上的贮液器中,打开活塞,以2 mL/min流速滴下。依次用2.5 mL丙酮、5 mL甲醇、5 mL乙腈在2 mL/min流速下淋洗柱子,用5 mL氨水- 乙腈(5 + 95)洗脱。弃去前2 mL,收集后面的洗脱液于玻璃管中,在40 ℃水浴上用氮气小心吹干,用水定容至1 mL,旋涡振荡或超声溶解,过0.45 um滤液膜后, 进行HPLC分析。
3. 液相色谱条件
流动相:
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