亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于低温(4~6℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。
操作步骤如下:
1 液体石蜡的准备
选用优质化学纯液体石蜡,将液体石蜡分装加塞,用牛皮纸包好,采用以下两种方式进行灭菌:
121℃湿热灭菌30min,置40℃恒温箱中蒸发水分,经无菌检查后备用。
160℃干热灭菌2个小时,冷却后,经无菌检查后备用。
2 斜面培养物的制备 参照定期移植法。
3 灌注石蜡 将无菌的液体石蜡在无菌条件下注入培养好的新鲜斜面培养物上,液面高出斜面顶部1cm左右,使菌体与空气隔绝。
4 保藏
4.1 注入液体石蜡的菌种斜面以直立状态置低温(4~6℃)干燥处保藏,保藏时间2~10年。
4.2 保藏期间应定期检查,如培养基露出液面,应及时补充无菌的液体石蜡。
5 恢复培养 恢复培养时,挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上,生长繁殖后,再重新转接一次。
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