灭菌过程致死率的确定方法

A.1 总则
本方法结合了生物指示物对给定周期的抗力和生物负载与抗力方面的知识以建立周期参数（作用时间）。使用本方法要求证明产品的生物负载水平在一定期限内保持相对稳定以及生物负载的抗力小于等于生物指示物的抗力。通过逐步增加作用时间和确定周期的灭活率证明生物指示物的抗力。这一比率和生物负载的菌数及相对抗力方面的知识可用于确定灭菌时间，从而可以预测SAL。
本方法的指南见ISO14161。
A.2 程序
A.2.1 确定产品中最难达到无菌的位置。
A.2.2 将生物指示物放置于产品中最难达到灭菌条件的位置，为灭菌过程创建监测，包括已知的微生物数量和已知的对EO的抗力。如果监测的位置不是最难灭菌的位置，应确定其与最难灭菌位置之间的关系。
使用经证明对灭菌过程的抗力比产品对灭菌过程的抗力大的PCD可满足本要求。需注意包装和从PCD中移除灭菌剂的影响。
A.2.3 使用与常规产品相同的包装方式对上述PCD进行包装，并放置于被灭菌物品中。
A.2.4 选择比常规条件具有较小致死性的条件将被灭菌物品暴露于EO中（见第8条），使基准微生物不会被全部灭活。
A.2.5 在EO作用时间递增而其他参数保持不变之后，使用以下方法之一确定过程的致死性：
a） 直接列举（见A.3.1）或
b） 部分阴性法（见A.3.2或A.3.3）或
c） a）和b）的组合方法。
注：部分阴性法采用在部分气体作用时间后PCD复活检测中有无细菌生长的方法。根据这一结果，可计算出基准微生物的灭活率。
A.2.6 根据产品生物负载方面的知识（见ISO11737-1），生物负载对灭菌过程的抗力和基准微生物的灭活率决定了达到规定SAL所需的处理范围。
A.3 确定过程致死性
A.3.1 直接列举
A.3.1.1 采用直接列举存活微生物创建存活曲线的方法确定灭菌周期的致死性。
A.3.1.2 ISO14161和ISO11138-1：2006 C.3给出了本方法的细节。
ISO11138-1：2006 C.3要求至少有五次作用覆盖以下方面：
a） 一次作用，样品没有暴露于灭菌剂（如：作用时间为0）；
注：没有灭菌剂或由惰性气体或媒体代替。
b） 至少一次作用，存活菌数降低至初始菌数的0.01%（降低4log10）；
c） 至少三次作用，覆盖作用a）和作用b）之间的时间段。
A.3.2 部分阴性法，使用Hocomb-Spearman Karber程序（HSKP）
用于EO灭菌的生物指示物应暴露于环氧乙烷，作用时间递增，而其它参数保持不变。作用后，通过直接浸于适当的培养基的方法对测试样品进行化验。计算培养后无菌生长的样品占样品总数的比率。ISO14161和ISO11138-1：2006 D.3.1给出了本方法的细节。
ISO11135-1：2007
ISO11138-1：2006 D.3.1要求至少有五种作用条件覆盖以下方面：
a） 至少一组样品，全部测试样品显示有菌生长；
b） 至少两组样品，部分样品显示有菌生长（量子区）；
c） 至少两组样品，显示无菌生长。
如果各个时间点的样品数量相同且时间间隔恒定，可使用更改的HSKP方法：Limited Hocomb-Spearman Karber程序（LHSKP）。进一步信息见ISO11138-1：2006 D.3.2。A.3.3 部分阴性法，使用Stumbo Murphy Cochran程序（SMCP）Stumbo Murphy Cochran程序（SMCP）要求部分阴性范围内有一个作用时间的结果包含时间t、有菌生长即阴性的单位数量r、重复次数n、及每次的初始污染菌数N0。为使用SMCP程序获取有效数据，ISO11138-1：2006 D.3.3要求通过至少三次部分阴性运行的平均数计算D值，以对再现性进行确认。
进一步指南见ISO14161。