烟草细胞:BY-2
1. BY-2 细胞培养
BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗生素的培养基中。
2. 用干转化的农杆菌GV3101的准备
(1)接种农杆菌单菌落到2 ml新鲜的YEB液体培养基中,28“培养过;
(2)取200ul培养物加到l0ml新的培养基中继续培养3-4小时:
(3) '5000 rpm,离心5 min集菌,用BY-2液体培养基重悬菌体,OD为0.5左右,待用。
3. 农杆蔺介导的BY-2悬浮细胞的外源基因转化
(1)取生长到第3或4天的BY-2细胞4 ml,加入上述备用的农杆菌液100ul,共培养 3天;
(2) 500 g离心2 min,收获细胞并用BY-2液体培养基(Amp 500 mg/L)洗3次 :
(3)将细胞稀释后铺于BY-2固体培养基的平板(Kan 100 mg/L, Amp 500mg /L )上,26℃黑暗培养。
(4)四周后,取出生长良好的愈伤小块,打散后放入液体培养基悬浮培养。
4. 农杆菌介导的BY-2愈伤组织的外源基因转化
(1)取培养2-3周的烟草愈伤组织小块浸入农杆菌液中20 min,取出用无菌滤纸吸干,置BY-2 培养基平板(无抗生素)上培养2天;
(2)取出愈伤小块,用无菌水洗4次,然后用含抗生素(Amp 500 mg/L)的无菌水浸泡30-60m in;
(3)取出愈伤小块,用无菌滤纸吸干,置于培养BY-2的平板(Amp500mg/L,Kan100mg/)上。
(4)培养四周后,挑出生长的愈伤小块,转移到新的抗性平板(Kan 100 mg/L)
上继续生长;
(5)取出生长良好的愈伤小块,打散后放入液体培养基中,26'C, 130 rpm,在摇床上黑暗培养;
(6)每7天继代一次。
“中国3亿吸烟者正在消耗全世界40%的卷烟,急需迅速行动遏制烟草导致的癌症死亡之潮。”在北京大学社会化媒体研究中心11月29日召开的“多措并举 共建无烟文化”媒体研讨会上,新探健康发展研究中......
招标编号:ZDJHZB-2022-114招标人:国家烟草质量监督检验中心资金来源:其它国家烟草质量监督检验中心2022年仪器设备采购(第二批)招标公告招标编号:ZDJHZB-2022-114项目所在地......
近日,中国烟草总公司郑州烟草研究院发布烟草微生物分析鉴定和筛选应用实验室建设项目配套仪器设备采购(第二批)公式,详情如下:需求:标段号序号货物名称数量(台/套)标段11自动微生物生化鉴定系统1标段21......
近日,中国烟草总公司郑州烟草研究院发布《烟草微生物分析鉴定和筛选应用实验室建设项目配套仪器设备采购(第二批)》招标公告,预计采购包括超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用仪在内的10类仪器。......
近日,中国农业科学院烟草研究所烟草功能成分与综合利用创新团队揭示了烟草转录因子NtMYB305a参与尼古丁代谢调控的分子机制。相关研究结果在线发表于《植物生理学(PlantPhysiology)》杂志......
实验方法原理质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42摄氏度短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。实验材......
近日,中国农业科学院烟草研究所植物功能成分与综合利用创新团队在烟草内生真菌中发现了抑菌、杀虫活性显著且毒性较小的异戊烯基化吲哚类活性化合物,为具有自主知识产权的高效低毒生物农药的研发提供了模板化合物。......
iNature据估计,2017年世界上有5500万人死亡,其中有1,770万人死于心血管疾病。记录全球(按经济水平分组)和各国风险因素与心血管疾病和死亡率之间关联的一致性或差异,将有助于制定全球和具体......
2019年8月4日,中国商务部据《海湾消息报》(GulfNews)报道,阿联酋联邦税务局(FTA)表示,开始执行“烟草及烟草产品税章标记计划”,从8月1日起,将禁止阿联酋市场上无电子税章的所有类型的烟......
在一项新的研究中,来自美国农业部和伊利诺伊大学香槟分校的研究人员将遗传构造体导入到烟草植物中,从而调整它们中的一种称为光呼吸(photorespiration)的过程。当一种称为Rubisco的酶意外......