吸收法 光度检测法是基于某些分子对光的吸收。被吸收的能量激发外层价电子由基态到较高的能级态。吸收能量的波长取决于分子内的化学键。
当样品中的分子吸收部分紫外或可见光时,检测器检测光线的强度减小。光强度的减小与样品中吸收光的分子的浓度成正比。
摩尔吸光度与分子的结构有关,对任何一种特定的物质,其值是常数。检测池的长度b由检测池的物理尺寸决定,因此也是一个常数。由于a和b都是常数,一旦吸光度已知,就可以容易地测定被测物C的浓度。在大多数的定量分析中,通过测定已知浓度的被测物溶液的吸收度,作出吸光度与浓度的工作曲线,然后就可以求出未知样品的浓度。
因为任何检测方式都存在吸光度和浓度之间线性关系的限制。比尔定律的偏差主要由以下的因素造成:
偏差是普遍的,但是可以通过工作曲线或标准加入的方法减少。
发射光度法 关于痕量分析,有一些检测器可以检测柱流出物中p克和f克水平。普通的吸光度检测器可以在p克范围测定具有很强生色基团的物质,但是测定经常受样品基体的干扰。
荧光检测具有较高选择性和灵敏度。不是所有能吸收光的化合物都产生荧光。因此有高的选择性。灵敏度的增加是由于较弱的荧光容易在非常低的背景条件下检测到的缘由。
自身具有荧光性质的化合物大多数含有一个环状的结构功能基。如果化合物不具备这样的功能基,可以将化合物或分子进行柱前或柱后衍生转变为具有荧光的化合物。
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