革兰氏阴性菌,如大肠杆菌(E. coli)和假单胞菌(Pseudomonads)等的细胞壁成分被认为是内毒素。它们具有一个亲水性多糖和亲脂性脂质结构,有别于它们所源自的细菌,具有高度的热稳定性和pH稳定性。内毒素属于致热源,如果它们与粘膜发生接触或者一旦它们进入血液循环,便会导致发热(参考文献详见Steck, 20061)。
根据通用的药典,在药物的生产工艺中内毒素含量不可超出所规定的限值。
在生物制药(如:免疫球蛋白)生产所需的哺乳动物细胞培养中,内毒素的出现可能会导致死亡。因此,在生物制药生产、细胞系传代,或者细胞培养过程中需要使用超纯培养基,当然也相应的需要超纯水,它们所含有的内毒素含量水平已获证明低于所规定的限值。
本研究的目的在于展示Arium pro VF系统产生的超纯水所具有的内毒素含量远远低于规定的限值,因而可用于上述各种应用。
为了对Arium pro VF系统所生产的超纯水中的内毒素含量进行检测,我们分别采用了凝胶法和显色法来测试。
下载全文查看实验设计方案: 下载全文
在0.001 EU/ml-0.05 EU/ml的浓度范围内,凝胶法显示的是阴性结果,意即无凝胶形成(无内毒素检测到;见表1);当浓度≥0.1 EU/ml时发生了凝集反应。该结果显示了在凝胶法的检测敏感限值内,在Arium pro VF系统所生产的超纯水中未出现内毒素。
显色法中,在405nm波长处的60吸附读数(见下图)根据标准样品中内毒素含量的不同生成了不同斜率的曲线。达到吸收率所需要的时间通过特殊的计算机程序进行计算,并将之用为推断具有未知内毒素含量的样品的依据(具体的值详见表1-显色测试)。由于具有zui低浓度(0.005-0.001 EU/ml)的标准样品和Arium水未达到所需的计算内毒素含量的消光值,因此它们被认定为低于检测限值。
Arium pro VF超纯水所获得的值明显比0.001 EU/ml曲线的绘制点更加低。下图显示了与两个选定的内毒素标准(0.05 EU/ml and 0.005 EU/ml)相比,在自来水、去离子水(DI水)和Arium水中所测得的内毒素浓度的数据集合。在水样品中的内毒素含量通过使用内毒素标准所测得的值来计算,详见表2.。
在DI水样品中,检测到内毒素为0.02 EU/ml,这个值低于WFI(注射用水)现行的有效值。在自来水中,出乎意料地检测到高达25 EU/ml的内毒素载量。该结果未作进一步分析。与之相对,在系统所产生的超纯水中所检测到意料之外的低值,< 0.001 EU/ml,这个值远远低于常见的限值。
在DI水样品中,检测到内毒素为0.02 EU/ml,这个值低于WFI(注射用水)现行的有效值。在自来水中,出乎意料地检测到高达25 EU/ml的内毒素载量。该结果未作进一步分析。与之相对,在系统所产生的超纯水中所检测到意料之外的低值,< 0.001 EU/ml,这个值远远低于常见的限值。
测试结果显示了Arium pro VF系统生产的超纯水可作为一种方便、实惠的选择,用于内毒素测试的样品制备,因为在其所生产的超纯水中检测到的内毒素浓度非常低(<0.001 EU/ml)。得到的结果也证实了早期关于在Arium超纯水中发现内毒素载量<0.001 EU/ml的试验。
在此超纯水中的内毒素浓度远远低于美国药典所规定的限值,这也使得该超纯水理论上适用于制药产品的生产/内毒素监测方面。相关的例子包括产品制剂,透析过滤解决方案,层析缓冲液以及用于萃取、清洗、无菌步骤和细胞培养方案的水等。
在细胞培养应用范围内,我们需要在工艺的各个步骤都对污染物保持高度警惕。为了对内毒素对细胞培养物及细胞敏感度的影响保持可控,尤其是与此类内毒素相关时,用于细胞培养的培养基都必须要明确不含可检测到的内毒素含量(见参考文献5)。
赛多利斯arium® 系列超纯水机--成就你的“大礼享”活动火热进行中!
1 Steck, S. : Endotoxine und ihre Bedeutung bei R & D Applikationen. Bioforum 6/2006.
2 Endosafe® -PTS™ Glucan Assay, Charles River Laboratories International, Inc, 2009.
3 Endotoxin Compendium, V 2.11, Hyglos GmbH, Bernried, Germany.
4 Untersuchungsbericht Fresenius Medical Care, Deutschland GmbH, Werk St. Wendel, 2007.
5 Dawson, M.E. : LAL Update von Associates of Cape CodIncorporated, March 1998, Vol. 16, No. 1. Adapted from the original German article by Dr. Herbig, June 7, 2012
我们要特别鸣谢德国Laupheim的Stephanie Steck of Rentschler Biotech¬nologie的Stephanie Steck博士,感谢他百忙之中抽空审查此篇文章并就相关主题开展了建设性的讨论。
分析测试百科网讯在第十九届中国国际科学仪器及实验室装备展览会及实验室装备展览会上,上海和泰仪器有限公司精彩亮相,为观众带来了DuraPro超纯水系统、Center系列全触屏超纯水系统、Medium/M......
实验室纯水应为无色透明的液体,其中不得有肉眼可辨的颜色及纤絮杂质。根据《分析实验室用水规格和试验方法》(GB6682-2008)规定,分析实验室纯水分为三个等级:一级水、二级水和三级水。1.三级纯水三......
分析测试百科网讯2020年11月16日,慕尼黑上海分析生化展(analyticaChina)在上海拉开帷幕。默克展台上精彩纷呈,展示着丰富的产品线,同时还有专业人员为用户全程讲解。接下来让我们看看它们......
在实验室科学研究领域,所关心的纯化起始点是自来水,如果实验室中已经有蒸馏水、去离子水或反渗透水,那就只注重超纯化的过程。实验室中,水环境作为绝大多数实验室的最基本环境,在实验中占的地位非常重要,水质往......
实验室纯水的质量要求⑪ 外观与等级实验室纯水应为无色透明的液体,其中不得有肉眼可辨的颜色及纤絮杂质。通常将实验室纯水分三个等级。① 一级水不含有溶解杂质或胶态质有机物,用于制备标准......
纯水氢气发生器,是一种用于氢燃料电池的自调式氢气发生器。采用零极距纯水电解池,以SPE固态电解质薄膜作为导电介质,贵金属导流板作为导电部件,使用时只需加入去离子纯水,通电后,电解池阴极产氢气,阳极产氧......
由于作为进水的纯水系统的制水速度较慢,因此在纯水系统与超纯水系统之间必须有水箱作为过渡。然而在水箱中贮放纯水会因为材质的溶出、空气中无机物质与有机物质的污染,以及微生物的繁殖等因素造成纯水水质的劣化,......
水的基本性质•1个水分子(H2O)是由1个氧原子和2个氢原子弯曲键结而成。由于正、负电荷的中心不一致,因此属于极性分子。当2个水分子同时存在时,二者会由静电交互作用与氢键结合,互相吸引并保持一定的距离......
近几年,水污染问题催热了家用净水器的市场,加之技术规范和行业规范、行业配套服务、售后服务以及监管等方面的不断完善,使得家用净水器行业的发展进入一个飞跃阶段,整个产业升级的突破口已逐渐凸显。据预测,20......
环境篇:1、原子吸收仪器应该放置在单独的实验室内(不与其它仪器混放);2、仪器上方有良好的排风装置;3、原子吸收仪器室不得放置有机试剂;4、实验室应具备独立的钢瓶室,并具备相应的防爆设施;5、稳定的2......