一、纸层析分离中的显色:
1、显色剂显示:被分离物质与显色剂生成有颜色的化合物,显示斑点位置。常用喷雾法 、浸渍法和涂刷法。
2、紫外光显示:有些物质受紫外光照射会发出荧光,可在紫外光照射下观察到被分离物质的斑点。
3、荧光薄层检测:如果样品斑点在紫外光照射下不显荧光,可在吸附剂中加入荧光物质或在制备好的薄层上喷雾荧光物质,制成荧光薄层,这样在紫外光照射下薄层显示荧光,而样品斑点不显荧光。
二、纸层析分离结果分析:
纸层析分离结果分析包括定性分析和定量分析,常与离心机分离技术结合使用。
1、定性分析:
层析后的斑点显示出来后,计算出各斑点的迁移率,即可以对物质进行定性分析。
2、定量分析:
(1)剪洗比色法:
将斑点剪下,用适当的溶剂洗脱后,通过分光光度计进行比色定量。
(2)直接比色法:
用特制的分光光度计直接测量滤纸上斑点颜色的浓度,画出曲线,由曲线所包含的面积可求出待测物的含量。
(3)面积测量法:
实验证明,圆形或椭圆形斑点的面积与物质含量的对数成正比,所以可用测量斑点面积的方法求得物质的含量。
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