细胞周期测定可应用于:(1)作为生物相容性评价指标;(2)研究细胞凋亡;(3)作为选择细胞的依据。
实验方法原理 | 体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比,它是测定细胞 周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 |
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实验材料 | 细胞 |
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试剂、试剂盒 | 胰酶甲醇培养液冰醋酸Giemsa染液 |
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仪器、耗材 | CO2培养箱普通显微镜培养皿盖玻片吸管 |
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实验步骤 | 一、消化细胞 ,将细胞 悬液接至内含盖玻片的培养皿中。 二、CO2培养箱中培养48小时,使细胞长在盖片上。 三、取出盖片,按下列顺序操作: PBS漂洗3分钟→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。 四、盖片晾干后反扣在载玻片上,镜检。 五、计算
分裂指数=分裂细胞 数/总细胞 数×100% 展开 |
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注意事项 | 操作时动作要轻,以免使盖片上的细胞脱落。 |
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其他 | Giemsa染液配制
称Giemsa粉末0.5 g,加几滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油总量为33 ml)。56℃中保温90-120分钟。加入33 ml甲醇,置棕色瓶中保存,此为Giemsa原液。使用时按要求用PBS稀释。一般稀释10倍。 |
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