4、自噬流检测方法
细胞经自噬诱导或抑制后,需对自噬流的水平进行观察和检测,常用的技术手段见表1:
表1 自噬体计数及自噬流检测方法汇总
(Mizushima et al, Cell, 2010)
其中,电镜观察法由于受到实验条件和设备的限制应用范围有限;而由于自噬过程发生快速,通过IB/WB检测LC3-II水平和GFP-LC3的方法易受到实验进行时长的影响。
想要准确检测自噬流的变化,需要多种技术手段共同使用,才能达到理想的实验效果,产生具有说服性的实验结果。
自噬双标产品 :mCherry-GFP-LC3B腺病毒(Adenovirus)、慢病毒(Lentivirus)和腺相关病毒(AAV)
mCherry-GFP-LC3B自噬双标系统的工作原理为: 未发生自噬的细胞及含有自噬体的细胞中,由于mCherry与GFP共同表达,细胞呈现黄色荧光。当自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体后,酸性的溶酶体环境使酸敏感的GFP荧光淬灭,而mCherry不受影响,进而使自噬溶酶体呈现红色荧光。因此,红色荧光可指示自噬溶酶体形成的顺利程度。红色荧光越多,绿色荧光越少,则从自噬体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻(见图4和附图)。
Vigene现推出mCherry-GFP-LC3B腺病毒、慢病毒和腺相关病毒,满足您实验的不同需要。
·简便直观,实现自噬可视化;
·准确指示,实现自噬流监测。
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