细菌 的新陈代谢都是在各种不同酶的催化下进行的,由于不同细菌的酶系统不同,其对营养物质的分解能力亦有差异,代谢产物亦不相同。故可利用生化反应的方法,测定细菌的各种代谢产物,借以区别和鉴定细菌。
一、单糖发酵试验
不同细菌具有发酵不同糖类的酶,因而分解糖类的能力各不相同。有的能分解某些糖产酸,有的则既能产酸又能产气,有的则不能分解,据此可以鉴别细菌。常用的糖(醇)有葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等。
【材料】
1、菌种:大肠杆菌、伤寒杆菌18-24小时琼脂 斜面培养物。
2、培养基:乳糖、葡萄糖液体发酵管。
【方法】
1、将大肠杆菌 、伤寒杆菌分别以穿刺法接种于乳糖及葡萄糖发酵管中,经37℃孵育18-24小时后观察结果。 2、如细菌生长,则培养基变混浊;糖是否被分解,根据以下现象判定:
(1)指示剂仍为紫色不变,表示细菌不分解该糖,用“-”表示;
(2)指示剂由紫变黄,无气体产生,表示细菌分解该糖,产酸不产气,用“+”表示;
(3)指示剂由紫变黄,并有气体产生,表示细菌分解该糖,产酸又产气,用“⊕”表示。
注:液体单糖发酵管是在无糖肉汤或蛋白胨水中加入1%糖类,指示剂常用溴甲酚紫,pH感应界为5.6-6.6,色调由黄→紫。
【结果】 葡萄糖 乳糖
大肠杆菌 ⊕ ⊕
伤寒杆菌 + -
二、吲哚(靛基质)试验
某些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚(靛基质)。吲哚本身无色,不能直接观察,如与吲哚试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用,形成红色的玫瑰吲哚,即为吲哚试验阳性。本试验常用于鉴别某些肠道杆菌。
【材料】
1、菌种:大肠杆菌、产气杆菌琼脂斜面18-24小时培养物。
2、培养基:蛋白胨水培养基。
3、吲哚试剂。
【方法】
1、分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支蛋白胨水培养基中。
2、37℃孵育24-48小时后取出,沿管壁加入2-3滴吲哚试剂于液面上,振摇试管使试剂与培养液混合,然后静置数分种,观看是否变色。阳性者可见上层试剂呈玫瑰红色,仍呈黄色者为阴性。
【结果】 大肠杆菌 +, 产生杆菌 -
三、硫化氢试验:
某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸(如胱氨酸、半胱氨酸)生成H2So 产生的H2S遇培养基中的铅或铁离子,则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀,黑褐色沉淀物越多,表示生成的H2S量越多,因此可间接地检测细菌是否产生H2S。
【材料】
1、菌种:大肠杆菌、变形杆菌18-24小时斜面培养物。
2、培养基:醋酸铅培养基。
【方法】
1、分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌于2支醋酸铅培养基内。
2、37℃孵育24小时后观察,穿刺部位呈黑褐色者为阳性,不变颜色者为阴性。
【结果】大肠杆菌 -,变形杆菌 +
四、尿素酶试验
某些细菌如变形杆菌具有尿素酶,因此,在含有尿素的培养基中,能分解尿素产生氨,使培养基变碱,此时培养基中的酚红指示剂显红色,借此可鉴别细菌。
【材料】
1、菌种:大肠杆菌、变形杆菌的18~24小时斜面培养物。
2、培养基:尿素培养基。
【方法】
1、分别将大肠杆菌、变形杆菌接种于两支尿素培养基上。
2、37℃孵育24小时观察结果,尿素培养基变红色者为阳性,颜色不变为阴性。
【结果】大肠杆菌 -,变形杆菌 +
五、细菌色素的产生:
【材料】普通琼脂平板,绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌
【方法】将绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌分别接种于普通琼脂平板上,经37℃24小时孵育后,观察结果。
注意菌落颜色及周围培养基的颜色。
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