胰蛋白酶与DNA相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用研究

摘要　当胰蛋白酶与鲱鱼精DNA ( hsDNA) 、鲑鱼精DNA ( sDNA)以及小牛胸腺DNA ( ctDNA)之间发生相互作用时, 共振瑞利散射(RRS)会显著增强, 并产生新的RRS光谱. 三者有近似的光谱特征, 其最大RRS峰分别位于307 nm ( hsDNA和sDNA体系)和290 nm处( ctDNA体系) , 另一散射峰位于350 nm处, 其散射强度(ΔI)与DNA或者胰蛋白酶的浓度成正比, 因此可用于蛋白质和DNA的相互测定. 当用胰蛋白酶测定DNA时, hsDNA, sDNA和ctDNA的检测范围分别为114 ×10 - 3～213, 211 ×10 - 3～215和315 ×10 - 3～119μg/mL ( ctDNA) , 它们的检出限分别为014, 017和111 ng/mL. 当用hsDNA测定胰蛋白酶时, 其线性范围为011～3010μg/mL, 检出限为3910 ng/mL. 研究了最佳的反应条件、影响因素和结合产物的化学性质, 考察了胰蛋白酶与DNA的结合比, 推测了它们的结合方式, 并以胰蛋白酶作RRS探针, 发展了一种高灵敏、简便和快速测定痕量DNA的新方法.