维生素D在鱼肝油和鸡蛋黄等食品中含量较多，一般成人不会缺VD，而婴儿容易缺乏。
1、操作步骤
⑴ 提取
样品（奶粉）＋水→混匀 在NH4OH的作用下酪蛋白Ca盐溶解加入乙醇使脂肪球分离→乙醚、石油醚萃取得到脂质（其它样品可用索氏提取得到脂质）
⑵ 皂化
在奶粉中脂溶性物质有VD、β-胡萝卜素、VA、VE、甾醇、脂肪。
目前皂化有三种情况：
低温（室温） | 中温（70℃±2℃） | 高温（100℃15min） |
低碱 | 低碱 | 低碱 |
回收率不完全 | 回收率46% | 回收率70% |
低碱 = 脂肪︰KOH为1︰2.5的关系
另外在皂化时加抗氧化剂与不加抗氧化剂回收率不一样，加抗氧化剂的回收率高于不加抗氧化剂的回收率。
有人将上面的皂化条件互补，采用中温-高碱并加抗氧化剂，这样的回收率为96.8%，效果较好。
故皂化条件 ：70℃±2℃高碱 + 抗氧化剂
⑶ 萃取
⑷ 除甾醇
甾醇在食品中含量较多，主要是通过柱子，这个柱子就是毛地黄皂甙。
甾醇 + 毛地黄皂甙 → 沉淀
洗脱液用乙醚︰己烷 = 1︰5配制而成
甾醇︰毛地黄皂甙 = 1︰14 用量
⑸ 皂土柱层析
当VD与VA共存时，须用皂土柱层析除VA及VA的分解产物。
测定方法有两种：
比色法：
维生素A／CHCl3 ＋ SbCl3／CHCl3／乙酰氮 → 形成橙黄色物质 → 500 nm下测定
紫外分光光度法
VD／乙醇 → 265 nm下测定
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