融合蛋白的酶解实验3

融合蛋白

SDS钠盐凝血酶裂解液凝血酶

水浴锅培养箱离心机

1.  准备两个小量预试验以确定最佳裂解反应条件：

（1）反应1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合适的缓冲液中）及0.2 μg 凝血酶。

（2）反应2：5 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（模拟消化），25℃下温育反应。

2.  在30 min、1 h、2 h 和4 h 等时刻从反应1中分别取出5 μl 反应液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混匀，-20℃冷冻。

3.  在4 h，往反应2（摸拟消化）中加入5 μl 2×SDS样品缓冲液。

4.  将5 μl 原始的融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混匀。

5.  将所有样品煮沸10 min，加样于SDS-聚丙烯酰氨凝胶上分析样品的稳定性以及裂解的效率。

6.  采用试验所得的最佳融合蛋白裂解条件，按比例任意扩大蛋白裂解反应。