融合蛋白的酶解实验6

融合蛋白

SDSCaCl2重组牛肠激酶

水浴锅培养箱离心机

1.  做预试验监测肠激酶与融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，准备5个反应体系：

（1）反应1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）/1 mmol/l CaCl₂至总体积30 μl。

（2）反应 5：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白，10 μl 50 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）/1 mmol/l CaCl₂（模拟消化）。

（3）样品于37℃温育16 h。

2.  在每个样品中加入30 μl 2×SDS样品缓冲液以终止反应，煮沸10 min。

3.  每个样品取10 μl 加样于SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分析它们的裂解程度。调整肠激酶浓度和温育时间以得完全消化。

4.  按比例扩大反应，消化更大量的融合蛋白。