补体介导的细胞毒实验

本实验中，Thy-1抗原是小鼠胸腺T 细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95％以上的胸腺细胞。

小鼠

Hank's液 抗小鼠Thy-1的单克隆抗体 补体 伊红-Y染液

解剖器械 平皿 不锈钢网 试管 吸量管 尖吸管 载玻片 盖玻片

1.  小鼠胸腺细胞悬液的制备
 

将 4～6 周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4 ml冷Hank's液的平皿中，在100 目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1000 rpm，5 分钟，用Hank’s液洗两次。将沉淀的细胞重悬于Hank's液中，配成1×10⁷ /ml细胞悬液。
 

2.  取试管3 支，标明顺序，依据下表依次加入1×10⁷ /ml胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体（最适稀释度）及Hank's液，放入37 ℃水浴30 分钟。

3.  取出后每管加入1 ％伊红-Y 染液1 滴，混匀，室温放置2 分钟。
 

4.  重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3 管中细胞死活情况。

1.  胸腺细胞制备速度要快，且需在冰浴中进行操作，以保持细胞活力。
 

2.  抗Thy-1 的单克隆抗体和补体的效价要在预实验中确定。
 

3.  细胞对照管死细胞数若超过5％，实验需重新做。
 

4.  细胞滴加到载玻片上后长时间放置不检测也可导致假阳性反应。

一、实验结果  
 

死细胞呈红色，无光泽且肿胀变大；活细胞不着色、有光泽且形态正常。
 

高倍镜下计数 200 个细胞并计算其中死细胞的百分数。

计算公式如下：