(1)以1%戊巴比妥钠溶液(50mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。
(2)将大鼠固定于手术台上,沿中线切开头皮挂线旷置。
(3)手术显微镜下沿眶内缘小心分离左眶软组织,尽量向两眦延伸。
(4)依照解剖层次分别牵开眼外肌肉,充分暴露眼球后极和视神经眶内段。
(5)纵向切开视神经背侧鞘膜,注意避免伤及视网膜中央动脉。
(6)在眼球后极1.5mm处以显微剪剪断视神经。
(7)剪取小片封口膜并展薄,戳一小孔,容视神经残段通过,将一小块明胶海绵浸吸5%荧光金溶液,包埋视神经残段以逆行标记节细胞。将封口膜折叠包裹视神经残段及明胶海绵填塞于眶后。
(8)术毕缝合眼眶,以及头皮,并抗感染处理,调整头皮张力,可容双睑闭合。术中及术后检查手术侧眼底血供情况。
(9)术后相应时间点处死动物取眼球进行视网膜铺片。
结果: 1.在手术过程中以及术后注意观察眼底是否出血或者缺血,造成这两者原因主要为眼损伤或剪断视网膜中央动脉,出现这两种情况的动物均不能用于后续试验。
2.在视网膜铺片后进行显微镜下观察,荧光金标记清楚,无未标上的区域,表明荧光金逆行标记试验成功(图4-12)。 3.荧光金标记的节细胞胞体多呈卵圆形,边界清晰,大小不一;其分布由中央向周边部逐渐稀少;在损伤2d后逐渐开始出现标记的小胶质细胞,为吞噬了死亡的节细胞而成金黄色,其形态为胞体细长,形态不规则,较易与节细胞区分开来。 展开 |