一、絮状沉淀试验
絮状沉淀试验为历史较久,又较有用的方法。该法要点是:将抗原与抗体溶液混合在一起,在电解质存在下,抗原与抗体结合,形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响,因而产生了两种最适比例的基本测定方法。
(一)抗原稀释法
抗原稀释法(Dean-Webb法)是将可溶性抗原作一系列稀释,与恒定浓度的抗血清等量混合,置室温或37℃反应后,产生的沉淀物随抗原的变化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。
表12-1Dean-Webb定量沉淀试验
管号 | 抗原 | 抗体 | 总沉淀量 | 反应过剩物 | 抗原沉淀量 | 抗体沉淀量 | 沉淀中Ab/Ag |
1 | 0.003 | 0.68 | 0.093 | Ab | 0.003 | 0.090 | 30.0 |
2 | 0.005 | 0.68 | 0.145 | Ab | 0.005 | 0.140 | 28.0 |
3 | 0.011 | 0.68 | 0.249 | Ab | 0.011 | 0.238 | 21.7 |
4 | 0.021 | 0.68 | 0.422 | Ab | 0.021 | 0.401 | 19.1 |
5 | 0.032 | 0.68 | 0.571 | Ab | 0.032 | 0.539 | 16.8 |
6 | 0.043 | 0.68 | 0.734 | - | 0.043 | 0.691 | 16.1 |
7 | 0.064 | 0.68 | 0.720 | Ab | - | - | - |
8 | 0.085 | 0.68 | 0.601 | Ag | - | - | - |
9 | 0.171 | 0.68 | 0.464 | Ag | - | - | - |
10 | 0.341 | 0.68 | 0.368 | Ag | - | - | - |
单位:mmol/L
从表12-1可以看出,1~5管为抗体过剩管,7~10管为抗原过剩管,唯第6管沉淀物最多,两者之比为16:1,即最适比。
(二)抗体稀释法(Ramon)法
本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应,计算结果同上法,得出的是抗体结合价和最适比。
现今,为了取得抗原与抗体的最佳比例,已将以上两法相结合,即抗原和抗体同时稀释,称为棋盘格法(亦称方阵法),找出最佳配比。举例见表12-2。
表12-2方阵最适比测定
抗体稀释度 | 抗原稀释度 | ||||||||
1/10 | 1/20 | 1/40 | 1/80 | 1/160 | 1/320 | 1/640 | 1/12 | 对照 | |
1/5 | + | ++ | +++ | +++ | ++ | + | ± | - | - |
1/10 | + | ++ | ++ | ++ | +++ | ++ | + | - | - |
1/20 | + | + | ++ | ++ | +++ | ++ | + | - | - |
1/40 | - | ± | + | + | ++ | +++ | ++ | + | - |
1/80 | - | - | - | - | + | + | + | + | - |
“+”为沉淀物量:为最适比
从表12-2可以看出,方阵法可较正确地找出抗原与抗体的最适比。如抗体用1:40。抗原则按1:320稀释;如抗原是1:160,抗本则用1:20最为恰当。
二、环状沉淀试验
环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的,其方法是:先将抗血清加入内径1.5~2mm小玻管中,约装1/3高度,再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。因抗血清蛋白浓度高,比重较抗原大,所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时,在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。本技术的敏感度为3~20μg/ml抗原量。环状试验中抗原、抗体溶液须澄清。该试验主要用于鉴定微量抗原,如法医学中鉴定血迹,流行病学用于检查媒介昆虫体内的微量抗原等,亦可用于鉴定细菌多糖抗原。因该技术敏感度低,且不能作两种以上抗原的分析鉴别,现已少用。
(责任编辑:xgh)
蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有bai盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂与某些酸(如三氯醋酸)沉淀等。乙醇沉淀蛋白质是蛋白发生变性析出。......
硫酸钡是一种细晶形沉淀,要注意控制沉淀条件生成较大晶体的硫酸钡.因此必须在热稀盐酸中不断搅拌下沉淀同时要缓慢滴加沉淀剂和搅拌,减少硫酸钡沉淀中包藏的硫酸杂质.盐酸太多会是溶液pH值减少,硫酸钡在酸性溶......
琼脂扩散试验包括琼脂双向单扩散试验和琼脂双向双扩散试验,后者是最常用的琼脂扩散试验,一般用于抗体或抗原的定性检测,其原理是可溶性抗原与相应的抗体(抗血清)在琼脂凝胶中向四周自由扩散,如果抗原和抗体相对......
1.化学氧化法在电镀废水治理中,化学氧化法主要应用于含氰废水的处理.该方法是在碱性的条件下,用氧化剂把游离氰离子以及与金属络合的氰离子氧化成氮气和二氧化碳。常用的氧化剂是次氯酸钠、液氯和漂白粉,也可以......
(一)晶形沉淀的条件1.在适当稀的溶液中进行降低(Q-S)/S,易得到粗晶形¯易洗涤、易过滤、吸附杂质量小;(但不宜过稀,否则被沉淀离子的损失量大。)2.在不断搅拌下进行,慢慢加入沉淀剂溶液防止局部过......
1.表面吸附:沉淀表面上离子的不完全等衡引起对杂质的吸附现象吸附规律:(1)首先吸附构晶离子或与构晶离子半径大小相近、电荷相同的离子; &nb......
(一)沉淀的溶解度(S) 对MA型沉淀: &nb......
一.沉淀重量法的基本步骤例:沉淀形式与称量形式相同沉淀形式与称量形式不同:二.沉淀重量法对沉淀的要求(一)对沉淀形式的要求1.S要小:溶解损失小于称量误差;2.沉淀要纯净;3.沉淀易于过滤、洗涤(尽可......
1.跑page胶的时候小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些,且分离效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分离。2.提取质粒的时候最后一步的酒精挥发很关键,基......
今天,同济大学杨海真科研团队成员、同济环境学院副教授孟祥周将启程赴澳大利亚,在那里搭上“雪龙号”,加入中国科考队执行第29次南极考察任务。孟祥周将前往南极中山站,围绕那里的“水土”,开展环境监测领域的......