阿魏酸的定性定量研究

【摘要】 目的建立产妇安软胶囊定性定量分析方法。方法采用薄层色谱法(TLC)对当归、川芎中的阿魏酸进行定性鉴别;采用HPLC法测定制剂中阿魏酸的含量，选用 Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm，5 μm)C18色谱柱，流动相为甲醇-乙腈-1.0%冰醋酸溶液(24∶4∶72);流速1.0 ml/min;检测波长为321 nm。结果薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰;阿魏酸在进样量为0.073～2.92 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9);平均回收率为99.44%，RSD为0.98%。结论所建立的分析方法简便可行，专属性强，可用于产妇安软胶囊的质量控制。

【关键词】 产妇安软胶囊; 薄层色谱; 高效液相色谱; 阿魏酸

产妇安软胶囊为《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂产妇安颗粒(标准编号：WS3-B-2693-97)经改变剂型研制而成。主要由当归、川芎、红花、益母草等7味中药材提取制成，具有祛瘀生新、活血化瘀、引血归经、促进子宫恢复之功效，临床上用于治疗产后血瘀腹痛，恶露不尽等症[1，2]。当归、川芎为本方中的君药，其主要有效成分为阿魏酸。产妇安颗粒原标准中未收载鉴别及含量测定项，药品质量难以得到有效控制。为此本实验对方中当归、川芎中的阿魏酸进行了薄层色谱鉴别研究，采用HPLC法对阿魏酸的含量进行测定，为建立产妇安软胶囊的质量标准，保证其在临床上安全使用提供基础研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器ZF-90型电暗箱式紫外线灯投射仪; BP211D电子天平;Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪，Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm，5 μm)C18色谱柱，SPD-10Avp检测器，N2010工作站。

1.2 试药甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯;产妇安软胶囊(四川禾邦制药有限责任公司);阿魏酸对照品(批号110773-9910)购自北京中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 当归、川芎的定性鉴别[3]取本品内容物3 g，加硅藻土3 g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流至提取液近无色，回收甲醇，残渣加水30 ml，加热使溶解，放冷，转移至分液漏斗中，用乙醚提取3次，20 ml/次，合并醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，20 ml/次，合并碱液，用醋酸乙酯洗涤3次，15 ml/次，弃去醋酸乙酯液，碱液加稀盐酸调节pH为2～3，用苯洗涤3次，15 ml/次，弃去苯液，水液再用乙醚提取3次，20 ml/次，合并醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再根据处方组成，按产妇安软胶囊的处方比例制备不含当归、川芎的软胶囊，按供试品溶液的制备方法，制备成阴性对照溶液。吸取上述对照品溶液5 μl，供试品及阴性对照溶液各20 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-二氯甲烷-醋酸(90∶25∶4)为展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。结果3批样品(071101，071102，071103)的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的深蓝色荧光斑点，缺当归、川芎的双阴性样品无干扰。见图1。

1.缺当归、川芎阴性样品 2.样品(071101)

3.样品(071102) 4.样品(071103) 5.阿魏酸对照品

图1 产妇安软胶囊中阿魏酸的TLC图谱

2.2 阿魏酸的含量测定

2.2.1 色谱条件采用Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm，5 μm)C18色谱柱;以甲醇-乙腈-1.0%冰醋酸溶液(24∶4∶72)为流动相;检测波长为321 nm;柱温30℃;流速1.0 ml/min。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，置棕色量瓶中，精密加入含0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液制成每毫升含30 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品10粒的内容物，混匀，取约2.0 g，精密称定，加硅藻土3 g，拌匀，精密加入含0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液25 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)20 min，放冷，再称定重量，用含0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备按缺当归、川芎的处方进行配制，然后同“2.2.3”项下的供试品溶液的制备方法进行制备，即得。

2.2.5 系统适应性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，阿魏酸与其它组分均能达到完全分离，缺当归、川芎的双阴性对照无干扰，理论塔板数按阿魏酸峰计算大于2 000。见图2。

图2 a-阿魏酸对照品 b-产妇安软胶囊 c-阴性样品的HPLC图谱

2.2.6 线性关系的考察精密称取阿魏酸对照品适量，置棕色量瓶中，精密加入含0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液分别配制成0.007 3，0.014 6，0.029 2，0.073，0.146与0.292 mg/ml的对照品溶液，分别精密取10 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标,进行线性回归，其回归方程为：Y =2.921 1×106X +5.8981×103 ，r=0.999 9(n=6)。结果表明阿魏酸进样量在0.073～2.92 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.7 精密度实验精密吸取对照品溶液，重复进样5次，按上述色谱条件测定，记录阿魏酸的峰面积，RSD=0.54%，结果表明精密度良好。

2.2.8 稳定性实验精密吸取上述同一批号供试品溶液10 μl，避光放置，分别于0，2，6，8，，12 h后进样，按上述色谱条件测定，记录阿魏酸的峰面积， RSD=0.94 %(n=5)，结果表明样品溶液避光放置，供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.2.9 重复性实验取同一批的产妇安软胶囊样品(批号071101)，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液及上述色谱条件重复测定6次，测得阿魏酸的平均含量为0.18%，RSD=1.53%(n=6)，结果表明方法的重复性好。

2.2.10 加样回收实验取同一批供试品(批号071101)约1.1 g，各6份，精密称定，分别加入阿魏酸对照品溶液(0.029 2 mg/ml)10 ml，按上述含量测定方法制备供试品溶液，依法测定，结果阿魏酸平均回收率为99.44%，RSD为0.98%，结果表明方法的回收率良好。结果见表1。表1 阿魏酸加样回收实验结果

2.2.11 样品的测定取10批样品，按上述方法制备供试品溶液，依法测定阿魏酸的含量。结果见表2。表2 10 批产妇安软胶囊中阿魏酸含量测定结果

3 讨论

当归、川芎是产妇安软胶囊处方中君药，均含有相同成分阿魏酸。故选用阿魏酸为对照品，对当归、川芎进行薄层鉴别研究，先后以苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶1∶0.5)和苯-二氯甲烷-醋酸(90∶25∶4)作为展开剂，结果后者的展开效果更好，斑点清晰。

阿魏酸对光和热不稳定，参考文献[4]最终确定提取方法采用0.5%冰醋酸的90%甲醇超声提取。采用超声处理，对提取时间进行了考察，提取时间分别设计为10，20 min 和 30，结果20 min 和 30 min测定变化不大，故提取时间选为20 min。

检测波长的选择 取阿魏酸对照品溶液，于200～400 nm进行紫外光谱扫描，在321.0 nm，234.5 nm，217.5 nm有最大吸收波长，其中以321.0 nm吸收系数最大，峰形较宽，对称性好，与文献[5～7]报道一致，故选择测定波长为321.0 nm。

【参考文献】

[1] 中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂第14册[S].1994：48.

[2] 唐移忠，莫可良.产妇安胶囊治疗人工流产后阴道流血临床观察[J]. 右江民族医学院学报，2008，3：434.

[3] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：131.

[4] 孙 忠，彭 康.HPLC法测定补阳还五汤中阿魏酸的含量研究[J].中医药学刊，2004，22(5)：833.

[5] 杨秀丽，赵 慧，陈 涛.HPLC法测定产妇安颗粒中阿魏酸的含量[J].天津药学，2006，18(4)：16.

[6] 阮 群，冯 绮，甘业梅.草香胃康胶囊质量标准研究[J]. 中成药，2007，29(9)：1328.

[7] 希尔艾力·吐尔逊，斯拉甫·艾白，凯撒·苏来曼.阿魏质量标准的研究[J].中成药，2007，29(9)：1388.