食品中大肠菌群检测方法的比较

　　【摘 要】随着近年来食品安全问题的突出，作为食品检测的重要检测对象，食品中大肠杆菌群检测也变得越来越重要。目前检测大肠杆菌群的方法随着技术进步也越来越多。本文比较了三中检测大肠杆菌群的方法，即发酵法、平板计数法、测试片法三种大肠杆菌群的检测方法，分析其优缺点，以便对大肠杆菌群的不同检测方法形成比较全面系统的认识，对以后的食品检测中检测大肠杆菌群有所帮助。 
　　食品安全与人们的健康紧密相关，食品检测已经成为反映食品加工、运输、贮存等各个环节卫生和侵权状况的重要手段。大肠杆菌群作为食品、饮用水以及其他公共卫生的重点检验对象，其检测方法的有效性将大大提高食品检测的效率。随着近年来科学技术的进步，大肠杆菌群的检测方法也不断发展，各国建立了大肠杆菌群的标准检测方法和快速检测方法。但是不同方法其检测原理和检测手段的不同，都会影响检测的灵敏度、准确性和快速性。为此在本文中，我们比较了发酵法、平板计数法、测试片法三种大肠杆菌群的检测方法，分析其优缺点，以便对大肠杆菌群的不同检测方法形成比较全面系统的认识，对以后的食品检测中检测大肠杆菌群有所帮助。 
　　1.发酵法 
　　发酵法是检测食品中大肠杆菌群的一种比较传统的方法，这种技术已经得到世界各国的普遍认可。最具有代表性的是美国环保局（EPA）和法国标准化联合会（FSA）分别早在20世纪90年代就已批准在本国实施该技术，并为此制定了相应的判别标准[1]。 
　　目前发酵法检测食品中大肠杆菌群主要采用的是国标GB4789.3-2010大肠菌群测定，是用月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）配置的肉汤管放在温度为（36±1）摄氏度的恒温培养箱中培养（24±2）小时，先观察倒管内是否有气泡产生，然后（24±2）小时后进行产气复发酵试验，如果未产气则需要继续培养（48±2）小时，产气者进行复发酵试验。在复发酵试验中，用接种环从产气的LST肉汤管中各取取培养物1环，移到含有煌绿乳糖胆盐（BGLB）的肉汤管中，放在（36±1）℃恒温培养箱中培养（48±2）h，观察产气的情况。产气的就计为大肠菌群阳性管。由于该方法操作繁锁，耗费较大的物力财力人力，所以不太适应大量检测工作的需求[2]。 
　　2.平板计数法 
　　大肠杆菌平板计数法检测分为两个阶段。在初培养中，选取2～3 个适宜的连续稀释度， 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿接种1mL。同时取1mL生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。迅速将 15mL～20mL冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）加入每个平皿中。小心地旋转平皿，使培养基与样液充分混匀，等到琼脂凝固以后，再加入3mL～4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板铺匀后，放在 36（℃±1）℃培养18～24h。平板菌落数按照以下方法选择：选取菌落数在 15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑的大肠菌群菌落。典型菌落呈现紫红色，并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为 不小于0.5mm。证实试验为：从VRBA平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种到BGLB肉汤管内，（36℃±1）℃培养24～48h，观察产气情况。凡是BGLB肉汤管产气，就可以报告是大肠菌群阳性。最后证实是大肠菌群阳性的试管比例乘以以上步骤中计数的平板菌落数总数，再乘以稀释倍数，就是每g（mL）样品中大肠菌群数。 
　　大肠菌群平板计数法操作起来比较简便，带有菌落的平板可以直接计数，还可以观察菌落特征，可见的菌落与大肠菌群量可以直接对应，便于得出定量结果，这种方法的缺点是因为大肠菌群在平板上很小，所以肉眼有时难以观察，需要用放大镜仔细辨认。验证实验需要挑选菌落，因此受人主观的影响很大，如果没有挑对或挑取的数量不够多都可能导致假阴性结果[3]。 
　　3.测试片法 
　　上述两种方法各有优缺点，使得检测食品中大肠杆菌群并不是十分高效。因此，探寻一种快速简便经济的检测方法变得尤为重要。大肠菌群快速检验纸片法（简称测试片法）1994年被正式列入食（饮）具消毒效果监测的国家标准后，该方法被各级卫生监督部门广泛使用，测试片法所用的材料简单，操作方便更快捷，检测所需时间仅为16～18h[4]。 
　　目前大部分测试片法主要是应用国外的纸片进行验证试验。姚景慧等人[5]比较了纸片法和国标法（GB法），对138份食品的菌落计数进行对比试验，结果呈现良好的相关性（P<0.05）；Suhren[6]比较了纸片法和标准平板计数法对牛奶进行的检测，结果也表明两者具有很高的相关系数（r=0.97—0.99）；唐漪炎报道[7]，采用美国3M公司pertifilm（PF法）菌落总数测定纸片（Petri film Aerobic Plates），对十余种奶制品进行了检测，PF法检出率较GB法效率要高，但两法无显著差别（P>0.05）。 
　　此外，孙京新等人[8]研究了肉品中菌落总数和大肠茵群快速检测试纸片两种方法。具体针对菌落总数和大肠菌群检测试纸片的制作工艺以及影响试纸片检测质量的各种因素，旨在研制出快速、准确度高、重复性好、简便实用的纸片检测法。在测试纸片法中培养基里加入了无色的TTC是作为受氢体，在细菌脱氢酶的作用下，TTC接受H还原成为红色较稳定的三苯甲唑，从而使菌落呈现红色，而如果是食品颗粒则看不到变化，这样就可以比较清晰地对群落进行计数，该研究发现采用试纸片法检测肉品菌落总数和国标法相有较高的符合率。但是在实际操作中，也有研究发现纸片法的结果有时结果也不是很清晰，有时模糊不清不易判断。 
　　综上所述，以上三种方法各有优缺点，在实际食品微生物检测中，应根据实际需要选取合适的方法，必要时可以不同方法兼顾，从而提高检测的准确率。例如用大肠杆菌平板计数法检测食品中微生物含量时，可以用发酵法进行复试验，或者用发酵法检测的时候同时用纸片法验证，从而提高检出效率和准确度。