饲料中孔雀石绿的分析测定（一）

图1.  50μg/ml 2种孔雀石绿及其氘代物色谱图。

本文建立了SPE-LCMS/MS测定粕类等植物源饲料中孔雀石绿的检测方法。用乙腈结合基质分散固相萃取，提取液经蒸干浓缩后用中性氧化铝和阳离子交换固相萃取柱净化, 使用HPLC-MS/MS进行检测，方法满足粕类等植物源饲料中孔雀石绿的检测需求。

孔雀石绿是一种三苯甲烷类染料，被广泛用于预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等。孔雀石绿具有高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，鉴于其危害性，加拿大于1992年就禁止将其作为渔场杀菌剂，加拿大和美国均规定在食用水产品中禁止检出孔雀石绿和无色孔雀石绿。欧盟于2002年6月也颁布法令禁止在渔场中使用孔雀石绿。我国于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》，并在2004年后出台了一些针对水产品中孔雀石绿的检测方法。2009年我国农业部也颁布了饲料中有关孔雀石绿及其代谢物的检测标准，饲料作为动物的食物来源也被纳入了孔雀石绿检测项目之中，主要针对的饲料品种为于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、鱼粉等。2011年在对一些进口豆粕、菜籽粕类产品质量安全情况进行监督检测时，多次发现从印度进口的粕类产品含有孔雀石绿和无色孔雀石绿。粕类是动物饲料生产的重要原料，是保证动物健康和动物安全卫生的关键，粕类产品中检出孔雀石绿的现象应当引起高度重视。据了解，粕类中加入孔雀石绿具有防霉、防虫的作用，因此不排除人为蓄意添加的可能。因此本文的工作目的是为了更新国家标准方法，建立粕类饲料中孔雀石绿检测的方法。

图2.  MG子离子扫描图。

仪器与试剂

高效液相色谱串联质谱仪：配电喷雾（ESI）离子源。安捷伦Vac Elut SPS 24 固相萃取装置，安捷伦Bond Elut AL-N 500mg，3ml和Bond Elut PRS 500mg，3ml强阳离子交换固相萃取小柱。

图3.  LMG子离子扫描图。

Bond ElutBondesil AL-N散装中性氧化铝，孔雀石绿草酸盐标准品：纯度≥95％。乙腈和甲酸为色谱纯，甲酸为优级纯，其余试剂均为分析纯， 实验室用一级水由Millipore milli-Q超系统制备。

图4.  内标D6-LMG子离子扫描图。

实验方法

仪器条件

液相色谱条件 参考原饲料中孔雀石绿检测标准《NY/T 1756-2009》提供的色谱条件：色谱柱为C18柱（150 mm×2.1mm，3.5μm）；流动相为0.1％甲酸溶液+乙腈=22+78（v+v）；流速0.25ml/min；柱温50℃；进样量20μl。

图5.  内标D5-MG子离子扫描图。

质谱条件 离子源：电喷雾ESI 离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；雾化气、锥孔气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氦气。使用前调节各气体流量，以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度，质谱条件见表1。

图6.  孔雀石绿和无色孔雀石绿的线性关系图。