黄曲霉毒素B1检测试剂盒使用说明书 (酶联免疫法)
1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样品中的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1),试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样品溶液,样本中的黄曲霉毒素B1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素B1抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素B1含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素B1的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度:0.03ppb(ng/ml)
2.2 反应模式:25℃,30min~15min
2.3 检测下限:
谷物……………………………………0.15ppb
配合饲料………………………………0.3ppb
食用油、花生…………………………0.6ppb
酱类、麦类等饲料……………………0.3ppb
啤酒……………………………………0.3ppb
葡萄酒、酱油、醋……………………0.15ppb
2.4 交叉反应率:
黄曲霉毒素B1…………………………100%
2.5 样本回收率:
谷物及配合饲料……………………85%±15%
花生…………………………………82±15%
食用油………………………………85±15%
酱类、麦类等饲料………………83±15%
啤酒………………………………84±15%
葡萄酒、酱油、醋………………87±15%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96孔
标准液(黑盖):各1ml
0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb
高标准液:100ppb…………………1ml
酶标记物(红盖)…………………5.5ml
抗体工作液(蓝盖)………………5.5ml
底物液A(白盖)……………………6ml
底物液B(黑盖)……………………6ml
终止液(黄盖)………………………6ml
20X浓缩洗涤液(白盖)……………40ml
说明书………………………………1份
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:单道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 试剂:甲醇、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知:
实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液:
配液1:样品提取液
70%甲醇,即V甲醇:V去离子水=7:3。
配液2:1×工作洗涤液
将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。
5.3 样本前处理步骤:
5.3.1 谷物处理方法
1)称取2g粉碎样品于50ml离心管中,加5ml样品提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去离子水,混匀;
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:5 检测下限:0.15ppb
5.3.2 玉米皮、麦麸等吸水性强的样本处理方法
1)称取2g粉碎样品于50ml离心管中,加20ml样品提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去离子水,混匀;(对于毒素含量极高的样本可用35%的甲醇稀释后再测。比如取2)中的混合液0.1ml加35%的甲醇0.9ml混匀,最终样本稀释倍数为200,检测下限为6ppb。)
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:20 检测下限:0.6ppb
注:由于毒素在样本中的分布呈非均匀状态,取样时需多点取样充分混匀后再取2g进行试验。
5.3.3 配合饲料处理方法
1)称取2g粉碎样品于50ml离心管中,加10ml样品提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去离子水,混匀;
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:10 检测下限:0.3ppb
5.3.4 食用油、花生、高油脂的饲料处理方法
1)称取2g粉碎样品于50ml离心管中,加8ml正己烷和10ml样品提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)去除上层液体,取0.5ml下层液体加入0.5ml去离子水,混匀,再取混匀液体0.5ml加入0.5ml 35%甲醇,振荡30S;
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:20 检测下限:0.6ppb
5.3.5 酱类、麦类、饼干、糕点等食品或调料,以及饲料浓缩料等饲料处理方法
1)称取2g粉碎样品于50ml离心管中,加10ml样品提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取2ml上清,加入4ml三氯甲烷(或二氯甲烷),振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
3)转移上层液体到另一容器中,下层液留置备用,向上层液中再加入4ml三氯甲烷(或二氯甲烷),充分振荡混5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
4)去除上层液体,合并两次的下层液体并充分混匀;
5)取合并后的下层液体2ml于50-60℃氮气下吹干;
6)加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去离子水混匀;
7)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:10 检测下限:0.3ppb
5.3.6 啤酒处理方法
1)将啤酒充分搅拌(去除CO2),取2ml啤酒样品,加入1ml蒸馏水,再加入7ml甲醇,振荡5分钟;
2)取混匀后的样品液0.5ml加入0.5ml去离子水,混匀;
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:10 检测下限:0.3ppb
5.3.7 葡萄酒、酱油、醋处理方法
1)取2ml样品,加入2ml蒸馏水,再加入10ml三氯甲烷(或二氯甲烷),振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取下层液体1ml于50-60℃氮气下吹干;
3)加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去离子水,混匀;
5)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:5 检测下限:0.15ppb