WIKI资讯
WIKI资讯
2. 总蛋白质荧光法染色荧光染色法结合了检测灵敏度 (可与银染法媲美) 与染色流程简便性 (与考马斯亮蓝染 色 或 Z n 2+ 反染法相同），且其线性定量范围较比色法大 10〜100 倍 。检测依赖于仪器,需要一个单色激发光源、能将波长较长的发射光从波长较短 (也更亮）的激发光中分离出来的选择性光学滤镜以及一个检测模块。对于许多荧光染料，可通过目视检测，但是其灵敏度不及采用摄像或仪器的方法。任何荧光染料都会带来一定程度的光漂白, 这是曝光的结果。许多市面上可购买的荧光染料已得到改进，光稳定性相对较好。尽管如此，在目测和图像采集前, 仍要小心避免将凝胶过久暴露于的外界强光之下。本章讨论的荧光染色法和染料的激发与发射的极限值在表 31.1 中呈列。通 常 ，光激发和发射的颜色经常以大类区分，即紫外线（U V )250 〜400n m ; 蓝 光 400〜500 n m ; 绿 光 500〜550 n m ; 黄......阅读全文
实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银
对于复杂混合物，如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分，通过两步正交的分离 (orthogonalseperation)，二维凝胶 (2D 胶）电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷，即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量，即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液
实验概要本文介绍了电泳后主要的凝胶染色方法，包括：标准考马斯亮蓝染色法、快速考马斯亮蓝染色法、凝胶铵银染色法、凝胶中性银染色法及凝胶铜染色法。实验步骤1. 标准考马斯亮蓝染色法 1) 电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-25
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很长一段时间内作为各种生化分析中分辨完整蛋白质的备选方法。这主要是因为对于疏水性很强的蛋白质,SDS 是最好的增溶去污剂，所有的蛋白质，包括碱性很强的蛋白质，都向同一方向移动, 分离取决于各自的表观分子质量 (通常称为分
本研究利用BCPDA进行固相TRF IA研究,它克服了解离增强体系需增强溶液、易受环境铕离子污染、只能液相测量等缺点,简化了测量步骤。结合BCPDA标记BSA,研究标记过程中的蛋白质含量测定。为TRF IA体系提供理论依据和实验技术 。材料和方法1 材料1. 1 仪器 分光光度计,核酸蛋白检测仪,
二维凝胶电泳(2-DE)是广为蛋白质组学科学家们应用的经典技术之一，蛋白混合物在两个维度上被分离。第一步是常规的等电聚焦，此过程中蛋白质根据其等电点被分离。接着，第二维使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，将蛋白质按分子量进一步分离。上述两步操作在互相垂直的两个方向上，使分离的蛋白
考马斯亮蓝染色法（CBB染色法）是目前蛋白质染色实验中相当常用的方法，它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，号称目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一，而又比硝酸银染色等其他方法更简便且更加容易操作，因而得到了广泛应用。 考马斯亮蓝染色法的全实验过程有两个关键且耗时较长的步骤，分别是染色和脱
实验步骤总蛋白质的检测1. 总蛋白质色度法染色简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银染法是可选择的色度方法。如果需要对切下的蛋白质进行质谱分析，则首选不会引入共价蛋白
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验 实验步骤
实验方法原理 聚丙烯酰胺凝胶, 是由丙烯酰胺单体( Acr ) 和少量的交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺(Bis) , 在催化剂(过硫酸铵或核黄素, 前者为化学聚合, 后者为光聚合) 和加速剂( N, N, N’,N’-四甲基乙二胺) 的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。改变单体浓度或单
实验方法原理 聚丙烯酰胺凝胶, 是由丙烯酰胺单体( Acr ) 和少量的交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺(Bis) , 在催化剂(过硫酸铵或核黄素, 前者为化学聚合, 后者为光
六、CID、ECD和 ETD的对比基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列，再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离（collision induced dissociation，C I D ) ( S w
七、P T M 的定量分析当研究 P T M 的生物学意义时，如能了解一个特定修饰或一组P T M 的相对或绝对丰度通常会有帮助。这样可以将不同的生物样品间的目的修饰进行直接比较。例如, 将正常与疾病状态下细胞或组织内某一 P T M 的丰度进行比较。定量分析这些变化能够帮助深人了解 P T M 在
实验方法原理聚丙烯酰胺凝胶, 是由丙烯酰胺单体( Acr ) 和少量的交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺(Bis) , 在催化剂(过硫酸铵或核黄素, 前者为化学聚合, 后者为光聚合) 和加速剂( N, N, N’,N’-四甲基乙二胺) 的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。改变单体浓度或单体与交联剂
详细阐述利用亲和层析分离蛋白质的过程，进行蛋白质分析时，需将此规模缩小至微量离心管中进行免疫沉淀过程，对于单一的蛋白质或由相同亚基组成的蛋白质，经单向凝胶电泳后检测到单一的 蛋 白 质 条 带对荧光染色法进行了阐述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的检测。为了确定蛋白质是否是特异性抗原，可采用相对应的抗体进
小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中的应用对比台式水平脱色摇床是生物学实验室常见的仪器设备，常用于普通凝胶电泳条带固定、考马斯亮蓝（CBB）染色脱色、硝酸银染色、蛋白质免疫印迹（Western Blot）、细胞培养和放射自显影等实验中。一般的台式水平脱色摇床主要是通过调节定幅载具的摆
（3）电荷效应在分离胶中，各种血清蛋白所带静电荷不同，而有不同的迁移率。表面电荷多，则迁移快，反之则慢。因此各种蛋白质按照电荷多少、分子量大小及分子形状以一定顺序排成一个个区带。不连续PAGE所具有的分子筛效应、浓缩效应和电荷效应大大提高了它的分辨率。电泳后蛋白质染色目前常用的是考马斯亮蓝法，其比氨
1.硫化氢试验属蛋白质和氨基酸代谢试验。 2.黏质酸盐阴性的克雷伯菌有鼻硬结克雷伯菌。 3.EB可以作为核酸分子电泳的指示剂，其原理是EB插入核酸分子之间并在紫外光下放射荧光。 4.耐高盐、可在8％NaCI胨水中生长的弧菌是副溶血弧菌。 5.钩端螺旋体的传播方式是接触疫
陈华 ，刘树滔 ，温腾 ，原山武 ，久保田英博 ，饶平凡(1．福州大学生物工程研究所，福建福州350002；2．日本ATI''''O公司技术开发部，东京113—8425)摘要：对第一向为载体两性电解质pH梯度等电聚焦双向电泳(Iso—DALT)中若干影响分离效果的实验
指示染料是做为电泳时迁移的可见标志。对于碱性缓冲系统，一般用溴酚蓝或酚红（通常每管加0.005毫升0.1%的染料溶液）。对于酸性缓冲液系统，一般用甲基绿或次甲基蓝。指示染料可直接加在玻璃中或上电极槽的缓冲液中，也可与样品液混合。 本实验样品液准备：取血清、F液、0.01%溴酚蓝指示剂各0.1ml，放
实验材料：ESI-MS
一、实验原理火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉
实验概要本文介绍了火箭免疫电泳的基本原理和主要操作流程。实验原理火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗
一、免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质
一、免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质
一、胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。 金溶胶必须有少量电解质作稳定剂，但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质
感染是病原体以某种传播方式从传染源传播到易感者，并在宿主体内生长繁殖、释放毒素或导至机体内微生态平衡失调的病理生理过程，大多数病原体是由外界侵入的，受病原体侵袭力、致病力及宿主免疫状态等多种因素的影响，其破坏人体内的微生态平衡后机体产生各种不同的感染状态，出现感染性疾病。 为了确定感染的发
细胞凋亡(Apoptosis) 又称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death，PCD)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。即是在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自主结束生命的死亡方式。凋亡一词最早是由年澳大利亚组织病理学家John Kerr通过研究大鼠肝左叶细胞死亡时，
实验材料ESI-MSMALDI - MS试剂、试剂盒提取缓冲液仪器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验步骤众所周知，在实验室内和实验室间难以保证双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的重复性。在我们实验室，强制性地要求严格遵守标准操作程序（sop ) , 以确保不同的操作者可以获得可重复的分离结果。小麦白面粉样品