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cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下,...(二)

8 标记探针的合成9 Northern 印迹(1)10X MOPS 缓冲液: 200 mmol/L MOPS, 50 mmol/L 乙酸納, 10 mmol/L EDT A , pH 7. 0。(2)I. 25% 甲醛变性胶:将 3.75 g 琼脂糖溶于 217 m L 双蒸水中,加 E B 至终浓度 Iμg / m L , 将该溶液 放 置 于 60°C 培养箱中。另取一灭菌瓶,加 人 30 mL IOX MOPS 缓冲液, 53 mL (37% , W ) 甲醛,将该溶液放人 60°C 培养箱中。等到两种溶液都平衡至 6 〇°C 后,将它们混合,轻轻旋转混勻,注意不要产生气泡,倒入较大的制胶板中。(3)RNA 样品溶解缓冲液: IXMOPS 缓冲液, 2.2 mol/L 甲醛, 5 0 % 甲 酰 氨(V/V )。(4)6X R N A 上 样缓冲液 : I X MOPS 缓冲液, 5 0 % 甲 酰 氨(V/V......阅读全文

cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下,...(一)

cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下,新表达基因的鉴定方法实验实验步骤 一、材料所有化学试剂均为分子生物学级纯度。所用塑料和玻璃制品,包括瓶子和移液器吸头均经高压蒸气灭菌。涉及核酸的操作均需带手套。1.总 RNA提取(1)无 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙 酯(DEP