滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验
实验方法原理 凝胶过滤层析是根据蛋白质分子大小不同而达到分离效果的，凝胶过滤填料中含有大量微孔，只允许缓冲液及小分子量蛋白质通过，而大分子蛋白质及一些蛋白复合物则被阻挡在外。因此，高分子量的蛋白质在填料颗粒间隙中流动，比低分于量蛋白更早地被洗脱下来。最大的蛋白质分子最早流出柱子，因为它们在到达柱底前经过的体积最小。中等大小的蛋白质可以进人填料分子中较大的孔内，因此它们晚一些到达柱底，而小蛋白质可以逬人所有填料的孔内，有最大的通过体积，故最后到达柱底。实验材料 蛋白质溶液试剂、试剂盒 缓冲液蓝色葡聚糖溶液乙醇乙腈乙酸胃蛋白酶仪器、耗材 低压层析系统实验步骤 1. 凝胶的填装1.1 凝胶的溶胀如果凝胶是脱水的干粉（例如 Sephadex）在使用前需要溶胀。1.1.1 一份凝胶加 10 份的缓冲液，原则上应将凝胶颗粒放入洗脱缓冲液中。1.1.2 在摇床上或手动搅拌混合，避免使用电力搅拌器。因为机械搅拌力会导致凝胶颗粒破裂成碎片，这些细......阅读全文
滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验_凝胶过滤层析法
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯
滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验
凝胶过滤层析法 实验方法原理 凝胶过滤层析是根据蛋白质分子大小不同而达到分离效果的，凝胶过滤填料中含有大量微孔，只允许缓冲液及小分子量蛋白质通过，而大分子蛋白
滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验
实验方法原理 凝胶过滤层析是根据蛋白质分子大小不同而达到分离效果的，凝胶过滤填料中含有大量微孔，只允许缓冲液及小分子量蛋白质通过，而大分子蛋白质及一些蛋白复合物则被阻挡在外。因此，高分子量的蛋白质在填料颗粒间隙中流动，比低分于量蛋白更早地被洗脱下来。最大的蛋白质分子最早流出柱子，因为它们在到达柱底前
蛋白质分离纯化方法之凝胶过滤层析法
在停止蛋白质研讨时，首先需求选择一套适宜的蛋白别离和蛋白纯化办法来获取高纯度的生物制品，来停止下一步的研讨。由于蛋白质具有颗粒大且不同蛋白质分子大小不同等特性，因而能够依据蛋白质分子大小不同而停止别离，这种别离办法有透析、超滤、离心和凝胶过滤，常包含在一些蛋白别离公司的效劳中。凝胶过滤是依据分子
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
疏水作用层析法 实验方法原理 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更疏水时，疏水强的少量蛋白质被吸附。这时疏水相互作用太强，需用极端方法洗脱，可能会导致蛋白质变性。苯基琼脂糖比辛基琼脂糖疏水性低，是疏水纯化中效果不错的常用介质
蛋白质的表达、分离、纯化实验——层析法
蛋白质表达、分离、纯化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理；（2）供作结构与功能的研究；（3）作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共
蛋白质的纯化实验——胶体过滤法
不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子量差异分离；是一种广泛应用的蛋白质partition色析法 。实验材料Sephacryl S-300胶体试剂、试剂盒缓冲液buffer A-150仪器、耗材色析管柱铁夹试管铁架水平仪收集器浓缩用离心机 浓缩用离心管实验步骤一、仪器设备色析管柱 （Pha
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
步骤一 偶联寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步骤二 核酸亲和层析 实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4
染料配基层析法纯化蛋白质实验
染料配基法 实验方法原理 选择纯化特异蛋白质的适宜染料一般是通过反复试验比较后决定。Cibacron Blue F3GA，作为该领域的先驱染料与烟酰胺腺嘌
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通过它们本身的碱基实现的。从理论上讲，该方法也许干扰最佳结合序列的接近路径，但是这样一个简单的方法一直被广泛地成功应用。偶联效率的定量检测可经 A260 值测定评估，或者更精确地从偶联介质上水解核酸和进行磷酸盐测定。实
离子交换层析法蛋白质的纯化实验
离子交换层析在纯化蛋白质的层析手段中使用最为广泛。它对蛋白质的分辨率高，操作简易，重复性好，成本低。按照离子交换原理，蛋白质可从大量缓冲性溶液中被分离，所以此方法尤适于蛋白质粗提物的初始纯化。在分离蛋白质时，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分离和不稳定蛋白质的纯化。离子交換层析提供了很多加速分离
离子交换层析法蛋白质的纯化实验
离子交换层析法 实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换（指与蛋白质末端离子的交换
离子交换层析法蛋白质的纯化实验
实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换（指与蛋白质末端离子的交换）；固定在树脂上。通过提高溶液中相反离子浓度或降低蛋白质所带电荷数等方法可将蛋白质从树脂上洗脱下来。利用此法，可根据不同蛋白质电荷性质不同而将其分离开来。若已
凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量实验_凝胶过滤层析法
凝胶过滤也称排阻层析、分子筛层析和凝胶层析。本实验目的是了解凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量的基本原理，巩固柱层析的操作方法。实验方法原理凝胶过滤( Gel Filt ration ) 也称排阻层析( Exclusion Chromatography)、分子筛层析(Molecular Sieve Ch
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验2
核酸亲和层析实验材料样品蛋白质试剂、试剂盒平衡缓冲液（Tris-HClKClEDTA）非特异 DNA实验步骤在上样品液到核酸亲和柱之前，建议首先采用其他的纯化方法，如硫酸铵沉淀、离子交换或凝胶过滤层析等富集目的蛋白。这样可以除去绝大多数的污染物，并减少非特异结合。亲和层析柱一般来讲是短而粗的，例如长
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验1
核酸亲和柱的应用极大地促进了核酸结合调节蛋白特性的研究，这些蛋白质涉及基因表达、染色体修复和复制、基因重组等的调控。核酸结合蛋白可以结合单链 DNA、双链 DNA 或 RNA。DNA 结合蛋白结合 DNA 可以是序列特异的，也可以是非特异的。此外，含有特异寡核苷酸的亲和树脂能用于某些酶的分离，这些酶
染料配基层析法纯化蛋白质实验——染料配基法
染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源：《蛋
蛋白质纯化亲和层析法
若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段，而亲和吸附胶上接有镍离子，此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体；洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。（Pharmacia 操作手册， Affinity Chromatography）。仪器设备：亲和层析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Pol
蛋白质凝胶过滤层析实验
凝胶过滤层析（也叫分子筛）是利用具有多孔网状结构的颗粒的分子筛作用，根据被分离样品中各组分相对分子质量大小的差异进行分离的技术。 凝胶过滤层析（GF）法又称为排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖
凝集素亲和层析法纯化蛋白质实验
刀豆素 A 亲和柱纯化蛋白质 实验方法原理 用于亲和层析的凝集素应根据它们结合的特异性和紧密度加以选择。例如，刀豆素 A（Con A）与糖蛋白含有的葡萄糖
凝集素亲和层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 用于亲和层析的凝集素应根据它们结合的特异性和紧密度加以选择。例如，刀豆素 A（Con A）与糖蛋白含有的葡萄糖或甘露糖结合，而麦芽凝集素只与具 N-乙酰葡糖胺的蛋白质结合。胞膜糖蛋白常与麦芽凝集素结合，而可溶性糖蛋白却通常用 Con A 或扁豆凝集素亲和柱纯化。由于在许多情
凝集素亲和层析法纯化蛋白质实验
凝集素是能可逆性结合碳水化合物的蛋白质。因为绝大多数凝集素至少每个分子有两个碳水化合物结合部位，所以它们可以沉淀糖蛋白和凝集细胞。凝集素也就可以用作糖蛋白的亲和配基，具有单糖的糖蛋白可用温和的蛋白质冼脱条件分离。虽然凝集素亲和层折没有很高的选择性，但是无疑它已成为蛋白质纯化的一种常用方法。它通常作为
蛋白质纯化胶体过滤法
蛋白质纯化胶体过滤法仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；分划收集器 （fraction collector, 需准备干净试管约100 支）；浓缩用离心机 （低速5,000 rpm）；浓缩用离心管Centriprep-30 （Ami
蛋白质纯化胶体过滤法
不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子量差异分离；是一种广泛应用的partition色析法 （Pharmacia操作手册， Gel Filtration）。仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（fraction
蛋白质纯化胶体过滤法
不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子量差异分离；是一种广泛应用的partition色析法 （Pharmacia操作手册， Gel Filtration）。仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（fracti
蛋白质纯化胶体过滤法
仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；分划收集器 （fraction collector, 需准备干净试管约100 支）；浓缩用离心机 （低速5,000 rpm）；浓缩用离心管Centriprep-30 （Amicon 4322）
蛋白质纯化胶体过滤法
实验概要本实验介绍了蛋白质纯化胶体过滤法，不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子量差异分离。主要试剂1. 胶体Sephacryl S-300 (Pharmacia)：a. 预先以缓冲液buffer A-150 平衡好，并且使完全沉降后的胶体体积，占全部体积的七至八成；要先预估好胶体
固相化金属亲和层析法纯化蛋白质实验
固相化金属亲和层析法 实验方法原理 固相化金属亲和层析的原理是利用暴露的蛋白质残基和介质上的金属离子之间的相互作用进行纯化。作为电子供体的表面氨基酸，特别是甘