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应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法实验

实验材料质粒试剂、试剂盒DNase 缓冲液EDTA 溶液TBE 缓冲液丁醇转化盐储液氨芐储液悬浮缓冲液硼酸缓冲液仪器、耗材水浴锅分光光度仪分光荧光计实验步骤本章主要介绍提高蛋白质热稳定性的常规方法，而不需要在高温下筛选酶活性。介绍完 β 内酰胺酶模型系统（见 16.3.1 )，我们描述末端截切（见 16.3.2 和 16.3.3 ) 的设计方案，它们对酶活的影响（见 16.3.4 )。突变库由酶的定向进化和错误向 PCR 产生（见 16.3.5)，然后在体内应用不同的筛选压力进行筛选（见 16.3.6)。在本节的最后一部分讨论截切突变体的再延长（见 16.3.7)、表达策略和纯化方案、酶学方法 ( 见 16.3.9 ) 以及稳定性检测（见 16.3.10)。3.1 β-内酰胺酶模型系统为了说明截切- 优化-再延长可以用来提高蛋白质的热稳定性，内酰胺酶被选作模型系统（图 16.1A )。作为一个临床发病机制相关的研究因子和重要的抗......阅读全文